Effets De L’interleukine 7 Humaine Recombinante Sur La Récupération De Cellules T Et De La Sortie Thymique Chez Les Patients Infectionnés Par Le VIH Recevant Un Traitement Antiretroviral: Résultats D’une Étude De Phase I / IIa Randomisée, Contrôlée Par Pl

Contexte L’immunodéficience du virus de l’immunodéficience humaine L’infection par le VIH n’est pas complètement corrigée par la thérapie ARV L’interleukine-7 IL-7 peut augmenter le nombre de lymphocytes T CD4, mais le dosage optimal et les mécanismes des augmentations cellulaires doivent être définis. augmentation de la dose de 10, 20 et 30 μg / kg de 3 doses hebdomadaires de IL-7 rhIL-7 humaine recombinante chez des personnes infectées par le VIH traitées par ARV avec des taux de lymphocytes T CD4 entre 101 et 400 cellules / μL et des taux plasmatiques de VIH 50 copies / mL La toxicité, l’activité et l’impact de la rhIL-7 sur la reconstitution immunitaire ont été surveillés. Résultats Des doses de rhIL-7 allant jusqu’à 20 μg / kg ont été bien tolérées. μL à 12 semaines et durable jusqu’à 1 an Augmentation du cycle cellulaire et augmentation de l’expression bcl-2 transitoire ont été observées Les cellules expansées n’avaient pas les caractéristiques des cellules T régulatrices ou activées. een chez 6 des 26 patients traités; L’IL-7 semblait augmenter la production thymique et avait tendance à améliorer le répertoire TCR des récepteurs des lymphocytes T chez les personnes ayant une faible diversité de TCRConclusions Trois doses hebdomadaires de rhIL-7 à 20 μg / kg sont bien tolérés et conduisent à une augmentation des lymphocytes T CD4 dose-dépendants et à l’élargissement de la diversité TCR chez certains sujets. Ces données suggèrent que cette dose de rhIL-7 pourrait être avancée dans les futures études cliniques rhIL-7 NCT0047732

L’interleukine 7 IL-7, une cytokine produite par les cellules stromales des ganglions lymphatiques et du thymus, a des effets profonds sur l’homéostasie des lymphocytes T humains et murins [1] L’IL-7 est nécessaire au développement thymique des lymphocytes T dans le thymus. Le récepteur IL-7 hétérodimérique IL-7R comprend une chaîne IL-7Rα de liaison à la cytokine et une chaîne γc commune de signalisation γc partagée par d’autres récepteurs de cytokines [3] L’IL-7R est exprimé Les patients présentant des mutations de l’IL-7Rα présentent une immunodéficience combinée sévère [3, 4] confirmant que l’IL-7 est essentielle au développement des lymphocytes T humains. Ceci est confirmé par la relation inverse entre les lymphocytes T circulants -7 niveaux et lymphocytes T CD4 périphériques constamment retrouvés dans les états lymphopéniques, y compris l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine VIH [5, 6] Des études sur des primates non humains ont montré que l’administration d’IL-7 était sûre et avait un impact significatif sur l’homéostasie des lymphocytes T [7-10], y compris le trafic et la prolifération des lymphocytes T dans la muqueuse intestinale [11] Chez l’homme, les études VIH et cancer de phase I démontrent l’innocuité et l’activité biologique de doses uniques ou répétées de IL recombinante non glycosylée. -7 rhIL-7 [12-15] Avec un profil d’innocuité favorable, il a été démontré que la rhIL-7 augmente le nombre de lymphocytes T CD4 et CD8 à mémoire naïfs et en circulation. Cependant, la dose biologiquement active la plus bien tolérée de rhIL-7 L’étude de phase I / IIa de l’administration répétée d’une rhIL-7 glycosylée chez des patients infectés par le VIH-1 et dont la numération des lymphocytes T CD4 a échoué a été interrompue [16, 17] Les objectifs de l’étude étaient d’identifier un régime posologique optimal pour les études de phase IIb / III de la maladie VIH sur la base de la toxicité et de l’efficacité et d’évaluer davantage les mécanismes de restauration des cellules T avec la thérapie rhIL-7

Sujets et méthodes

Sujets

Les sujets éligibles étaient des patients chroniquement infectés par le VIH-1 avec un nombre de cellules T CD4 de 101-400 cellules / μL et des taux plasmatiques d’ARN du VIH & lt; 50 copies / mL pendant ≥ 6 mois tout en recevant un traitement antirétroviral pendant> 12 mois Les ARV acceptables comprenaient tout inhibiteur de la protéase avec ou sans ritonavir ou tout inhibiteur non nucléosidique de la transcriptase inverse associé à 2 inhibiteurs nucléosidiques de la transcriptase inverse

IL-7 humaine recombinante

CYT107 est un rhIL-7 de 152 acides aminés purifié glycosylé exprimé dans une lignée de cellules CHO d’ovaire de hamster chinois.

Conception de l’étude et points de terminaison

Un plan d’escalade de dose randomisé, contrôlé par placebo, en simple aveugle, interpatient a été choisi pour faciliter le remplacement des sujets selon les besoins et aussi parce que les réactions au site d’injection décourageraient le personnel d’étude. institutions en France, en Italie, aux États-Unis et au Canada et a été enregistré dans la base de données EudraCT http: // eudractemeaeu /; protocole 2006-00624-20A et à clinicaltrialsgov NCT0047732, IND 100538, et CTA 9427-C2666 / 1-21C Tous les participants ont signé un consentement éclairé avant l’inscription. Les sujets ont reçu 3 injections SC sous-cutanées hebdomadaires de rhIL-7 les jours 0, 7 et 14 Trois doses différentes de CYT107-10, 20 et 30 μg / kg ont été testées séquentiellement Dix patients 8 recevant de la rhIL-7, 2 recevant un placebo de chlorure de sodium ont été randomisés dans chaque groupe de dose et ont été vus les jours 0, 7, 14, 21 , 28, et 35, semaines 9 et 12, puis tous les trimestres jusqu’à la semaine 52 Le critère d’évaluation principal était la sécurité, qui a été évaluée par la déclaration des effets indésirables à l’aide de la division du sida. tout événement indésirable de grade 3 ou 4, une éruption cutanée de grade ≥ 2 ou un syndrome inflammatoire de restauration immunitaire; une augmentation confirmée des taux plasmatiques d’ARN du VIH à> 075 copies log10 / mL au jour 28 ou 35; détection d’anticorps neutralisant l’IL-7 plasmatique à des dilutions ≥ 1: 400; tout diagnostic de lymphome; adénopathie compromettant ou menaçant la fonction des organes Les critères secondaires incluaient des changements par rapport aux valeurs initiales des numérations des lymphocytes T CD4 et CD8. La valeur initiale était définie comme la moyenne de 4 valeurs, dont 2 obtenues dans les 6 mois précédant l’entrée dans l’étude, et le jour 0 valeur

Immunophénotypage

Les cellules marquées ont été acquises avec un cytomètre LSRII et analysées en utilisant le logiciel DiVa Version 60 Neuf sous-ensembles de lymphocytes T Tableau supplémentaire 1 et les phénotypes ont été définis en utilisant les anticorps suivants: CD3-AmCyan, CD4- PB, CD8-PerCP-Cy55, CD45RA-ECD, CD27-APC-Alexa-750, CCR7-PE-Cy7, CD31-FITC, CD127-Alexa-647, PD-1-PE, Bcl2-FITC, HLA-DR- Alexa-700, CD38-FITC, Foxp3-Alexa700 et Ki-67-FITC

Quantification des cercles d’excision du récepteur T-Cell

Quantification parallèle des cercles d’excision des récepteurs Tj des cellules T Les TREC et chacun des treize TRECs DJβ, ainsi que le gène CD3γ utilisé comme gène d’entretien, ont été réalisés en utilisant la technologie LightCycler Roche Diagnostics, comme décrit ailleurs [18] Le ratio sj / β TREC a été calculé comme décrit ailleurs sj / β TREC = sj TREC / 105 cellules / DJβ1 TRECs / 105 cellules DJβ2 TRECs / 105 cellules

Diversité du répertoire

Le répertoire TCR du récepteur des lymphocytes T a été mesuré à l’aide du test ImmunID Technologies ImmunID et la diversité Le score Divpenia et NDL a été analysé à l’aide du logiciel Constel’ID ImmunID En résumé, 5 × 106 PBMC ont été décongelées et remises en suspension dans du tampon EasyID. l’analyse a été réalisée sur l’ADN génomique, comme décrit ailleurs [19, 20]

Quantification de l’ADN du VIH

L’ADN du VIH-1 a été quantifié dans le sang total obtenu aux jours 0, 28 et 12 en utilisant une méthode de PCR en temps réel [21] Les résultats ont été convertis en 106 lymphocytes T CD4 par lymphocyte, monocyte et lymphocyte T CD4. compte, selon la formule suivante: [copies HIVDNA / 106 cellules T CD4 = copies d’ADN du VIH / 106 PBMC × cellules PBMC / μL / CD4 T / μL] Les niveaux d’ADN VIH ont également été calculés en copies par ml de sang total: Copies d’ADN / mL de sang total = Copies d’ADN du VIH / 106 PBMC × lymphocytes / μL de monocytes / μL / 1000]

Analyses statistiques

Tous les patients ayant reçu ≥1 injection ont été inclus dans les analyses de sécurité. L’activité immunologique a été évaluée chez les patients ayant reçu les 3 administrations hebdomadaires. Les changements dans les numérations des lymphocytes T CD4 ont été calculés comme valeurs absolues, tandis que les changements dans l’expression des marqueurs le test de Wilcoxon pour les échantillons appariés L’analyse statistique a été réalisée avec le logiciel SAS, version 92 SAS Institute

RÉSULTATS

Conception d’étude et sujets

Quarante-sept sujets ont été examinés, et 32 ​​ont été inclus 10, 12 et 10 dans les groupes de 10, 20 ou 30 μg / kg, respectivement. Figure 1 Les caractéristiques de base sont énumérées dans le tableau 1 Dans l’ensemble, 6 patients ont reçu le placebo 2 Chaque groupe de dose A 10 μg / kg, 7 sujets ont reçu 3 injections chacun et 1 sujet a reçu une seule injection. A 20 μg / kg, 8 sujets sur 10 ont reçu 3 injections et 2 ont arrêté le traitement après 1 ou 2 injections. La dose totale a été administrée en une seule fois et la seconde en raison d’une erreur de dosage. À 30 μg / kg, 6 sujets sur 8 ont reçu 3 injections et 2 ont reçu 1 injection en raison d’un événement toxique dose-limité après la première injection. le suivi de l’étude

Tableau 1 Caractéristiques des participants au traitement par groupe de traitement rhIL-7 Traitement Caractéristique 10 μg / kg n = 8 20 μg / kg n = 10 30 μg / kg n = 8 Placebo n = 6 Âge, années 43 27-66 42 35-52 49 41 -52 53 48-59 Ratio hommes-femmes 5: 3 9: 1 8: 0 3: 3 Temps écoulé depuis le diagnostic du VIH, années 5 5-22 5 2-8 21 19-23 14 3-24 Durée de l’ARV, années 4 1-16 1 1-3 6 1-15 9 3-17 Nombre de cellules T, cellules / μL CD4b 268 152-373 240 197-323 276 207-370 280 203-344 CD8c 761 530-857 659 376-1090 415 209-1524 502 393-1123 Nadir CD4 100 10-278 98 8-206 128 8-254 45 5-210 Ratio CD4 / CD8 035 018-062 039 018-064 05 019-145 050 017-080 ADN VIH proviral, log10 copies / 106 Cellules CD4 365 279-420 404 327-441 313 169-433 337 305-350 rhIL-7 Traitement Caractéristique 10 μg / kg n = 8 20 μg / kg n = 10 30 μg / kg n = 8 Placebo n = 6 Âge, années 43 27-66 42 35-52 49 41-52 53 48-59 Rapport homme-femme 5: 3 9: 1 8: 0 3: 3 Temps écoulé depuis le diagnostic du VIH, années 5 2-22 5 2-8 21 19-23 14 3-24 Durée de l’ARV, années 4 1-16 1 1- 3 6 1-15 9 3-17 Nombre de cellules T, cellules / μL CD4b 268 152-373 240 197-323 276 207-370 280 203-344 CD8c 761 530-857 659 376-1090 415 209-1524 502 393- 1123 Nadir CD4 100 10-278 98 8-206 128 8-254 45 5-210 Ratio CD4 / CD8 035 018-062 039 018-064 05 019-145 050 017-080 ADN VIH proviral, log10 copies / 106 cellules CD4 365 279-420 404 327-441 313 169-433 337 305-350 À l’exception des sex-ratios, toutes les valeurs représentent les plages médianes Il n’y avait pas de différences significatives entre les groupes dans l’une des variables énumérées Tous les sujets avaient des taux plasmatiques d’ARN du VIH / mLAbbreviations: ARV, antirétroviral; VIH, virus de l’immunodéficience humaine; rhIL-7, interleukine humaine recombinante 7a Datab dérivée La numération lymphocytaire T CD4 initiale a été définie comme la moyenne de 4 valeurs, 2 dans les 6 mois précédant l’entrée dans l’étude, 1 dans le dépistage et 1 au jour 0c. le nombre de cellules a été défini comme la moyenne des résultats au dépistage et au jour 0

RhIL-7 Induction de l’augmentation soutenue dépendante de la dose des lymphocytes T

Les sujets des groupes 10, 20 et 30 μg / kg et du groupe placebo présentaient un nombre de lymphocytes T CD4 initial de 268, 240, 276 et 280 cellules / μL. À la 12e semaine, les lymphocytes T CD4 étaient de 419, 563, 799 , et 259 cellules / μL P & lt; Figure 1A Les augmentations dépendaient de la dose de 188, 323 et 551 cellules / μL, respectivement, les cellules T CD8 étaient de 761, 659, 415 et 502 cellules / μL au début de l’étude. 10, 20 et 30 ug / kg et les groupes placebo et à la semaine 12, ont augmenté à 1081, 1210, 1011 et 487 cellules / ul, respectivement Figure 1B P & lt; 002 représentant les changements par rapport aux valeurs initiales pour chaque groupe de dose, comparativement au placebo À la 52e semaine, le nombre de lymphocytes T CD4 est demeuré significativement plus élevé que le taux initial dans tous les groupes de doses de rhIL-7, respectivement 154, 172 et 209 cellules / μL; tout P & lt; 005 La numération des lymphocytes T CD8 est également restée significativement plus élevée chez les sujets traités par rhIL-7 par rapport au taux de départ P & lt; 01

Figure 1View largeDownload slideChangements dans les numérations des lymphocytes T après l’administration de l’interleukine 7 recombinante humaine rhIL-7 A, B, CD4 A et CD8 B T-cellule médiane, trimestre 1 trimestre 3 a augmenté de manière significative à la semaine 12 jour 77 après une rhIL-7 cycle 1 injection hebdomadaire pendant 3 semaines P & lt; 002, représentant les changements par rapport aux valeurs initiales pour chaque groupe de dose par rapport au placebo. L’augmentation dépendait de la dose pour les lymphocytes T CD4 et CD8 et restait significative à la semaine 52 P & lt; 005 et P & lt; 01 pour CD4 et CD8, respectivement C-F, Naïf et mémoire centrale Les sous-ensembles de lymphocytes T CD4 et CD8 ont augmenté après l’administration de rhIL-7 P & lt; 05 représente les comparaisons entre les groupes de 20 et 30 μg / kg et le groupe placebo par Wilcoxon rank test G, l’administration de rhIL-7 a augmenté le nombre absolu de lymphocytes T régulateurs Tregs, mais leur fréquence a été significativement diminuée Abréviations: CM, mémoire centrale; N, naiveFigure 1Voir grandDownload slideChangements dans les numérations des lymphocytes T après administration de l’interleukine 7 recombinante humaine rhIL-7 A, B, CD4 A et CD8 B T-cellule médiane, trimestre 1-trimestre 3 significativement augmenté à la 12ème semaine 77 après une rhIL -7 cycle 1 injection hebdomadaire pendant 3 semaines P & lt; 002, représentant les changements par rapport aux valeurs initiales pour chaque groupe de dose par rapport au placebo. L’augmentation dépendait de la dose pour les lymphocytes T CD4 et CD8 et restait significative à la semaine 52 P & lt; 005 et P & lt; 01 pour CD4 et CD8, respectivement C-F, Naïf et mémoire centrale Les sous-ensembles de lymphocytes T CD4 et CD8 ont augmenté après l’administration de rhIL-7 P & lt; 05 représente les comparaisons entre les groupes de 20 et 30 μg / kg et le groupe placebo par Wilcoxon rank test G, l’administration de rhIL-7 a augmenté le nombre absolu de lymphocytes T régulateurs Tregs, mais leur fréquence a été significativement diminuée Abréviations: CM, mémoire centrale; N, naïfUne dose biologiquement active était définie comme une dose induisant une augmentation des lymphocytes T CD4 ≥ 50% par rapport à la valeur initiale à la semaine 12 chez 6 des 8 sujets traités. Les doses de 20 et 30 μg / kg étaient biologiquement actives. un seuil de numération des lymphocytes T CD4 de 500 cellules / ul à toutes les doses de rhIL-7 était de 14 jours; et à la semaine 12, 625% 5 des 8 sujets et 100% 6 des 6 sujets dans les groupes 20 et 30 ug / kg ont maintenu un compte de lymphocytes T CD4> 500 cellules / μL données non montrées

Effets de l’administration de la rhIL-7 sur les populations de lymphocytes T CD4 et CD8

Nous avons ensuite étudié le phénotype des cellules T rhIL-7-expansées. Nous avons trouvé un effet dose-dépendante de la rhIL-7 sur les lymphocytes T CD4 naïfs et centraux au jour 28 qui restait significativement différent de la valeur initiale à la semaine 12 traité avec les 2 doses les plus élevées P & lt; 05 Figure 1C et 1D Des effets moins prononcés ont été observés pour la mémoire effectrice et les données des cellules effectrices terminales non montrées. Les effets IL-7 étaient nettement plus prononcés sur les sous-ensembles de lymphocytes T CD8 naïfs que sur les lymphocytes T CD8 Figure 1E et 1F, atteignant une signification statistique à la fois sous-ensembles les jours 28 et 77 P & lt; 05-12Résultats récents de l’interleukine 2 Les essais thérapeutiques à base d’IL-2 chez des patients infectés par le VIH ont soulevé des inquiétudes selon lesquelles les phénotypes des cellules CD4 [22] et des Tregs régulatrices des cellules T présentent des caractéristiques similaires [23, 24]. L’expansion de CD4 a également augmenté transitoirement les nombres absolus de Tregs CD4CD25CD127-FoxP3 dans tous les groupes traités au jour 28 P & lt; 001 Figure 1G Cependant, la fréquence relative des Tregs a diminué significativement chez les sujets traités par rhIL-7 au jour 28 P = 0005 par rapport au groupe placebo Figure 1G, car les autres sous-groupes CD4 présentaient des expansions plus importantes

Effets de l’administration de la rhIL-7 sur les marqueurs de l’homéostasie des lymphocytes T

Par rapport au groupe placebo, toutes les doses de rhIL-7 ont augmenté la fréquence de l’expression de Ki-67 parmi les groupes poolés de lymphocytes T CD4 mémoire naïfs, mémoire centrale et effecteurs, tous P & lt; 001 au jour 7 Figure 2A Cet effet a atteint son maximum au jour 7, après 1 dose de rhIL-7 dans chaque groupe. Un effet similaire de rhIL-7 a été noté parmi les sous-populations de lymphocytes T CD8 Figure 2A Cet effet ne dépend pas de la dose Figure 2A Comme montré ailleurs chez les patients cancéreux [15], une augmentation transitoire significative des cellules T CD4 et CD8 exprimant Bcl-2 a été observée au cours de la thérapie rhIL-7 au jour 7 et 14 pour les groupes rhIL-7 regroupés, P & lt; 001; ces comptes sont ensuite revenus à des valeurs inférieures à la valeur de référence P & lt; 001 à la semaine 12 [jour 77] Supplémentaire Figure 2

La cytométrie de flux a été utilisée pour déterminer l’expression de Ki-67 dans les sous-ensembles de cellules T Augmenté naïf, la mémoire centrale CM, et effecteur mémoire T Figure 2View largeDownload slideCyclage de sous-ensembles de cellules T CD4 et CD8 en réponse à l’interleukine 7 humaine recombinante rhIL-7 On a observé une cyclocellule à la semaine 7 dans les groupes rhIL-7 regroupés par rapport au placebo, P & lt; 001, retour à la valeur initiale au 28ème jour médian, Trimestre 1-Trimestre 3 L’augmentation n’était pas dose-dépendante et se produisait dans les deux sous-groupes CD4 et CD8 B, expression PD-1 diminuée sur les cellules T CD4 et CD8 28 jours après 20 et 30 μg / kg d’administration de rhIL-7 P & lt; 05 pour chaque La diminution a persisté jusqu’au jour 77 P & lt; 05 C, CM sous-ensembles ont montré une diminution de l’expression de PD-1 Abréviations: CM, mémoire centrale; EM, mémoire effectrice; N, naiveFigure 2View largeDownload slideCyclage des sous-ensembles de lymphocytes T CD4 et CD8 en réponse à l’interleukine 7 recombinante humaine rhIL-7 A, cytométrie en flux a été utilisée pour déterminer l’expression de Ki-67 dans les sous-ensembles de cellules T On a observé un cycle de lymphocyte T à mémoire dans les groupes rhIL-7 regroupés au jour 7 par rapport au placebo, P & lt; 001, retour à la valeur initiale au 28ème jour médian, Trimestre 1-Trimestre 3 L’augmentation n’était pas dose-dépendante et se produisait dans les deux sous-groupes CD4 et CD8 B, expression PD-1 diminuée sur les cellules T CD4 et CD8 28 jours après 20 et 30 μg / kg d’administration de rhIL-7 P & lt; 05 pour chaque La diminution a persisté jusqu’au jour 77 P & lt; 05 C, CM sous-ensembles ont montré une diminution de l’expression de PD-1 Abréviations: CM, mémoire centrale; EM, mémoire effectrice; N, naïf

Effets de la rhIL-7 sur l’expression des cellules T de mort programmée 1

La proportion de lymphocytes T exprimant la PD-1 programmée-Death 1, un marqueur d’activation ou d’épuisement chez les sujets infectés par le VIH [25], a également été évaluée Comme le montre la figure 2B, la fréquence des lymphocytes T CD4PD-1 et CD8PD-1 diminution significative par rapport à la valeur initiale jusqu’à une diminution de 40% chez les sujets traités par 20 ou 30 μg / kg de rhIL-7; P & lt; 05 pour CD4 et CD8 et cellules T mémoire aux jours 28 et 77 L’administration de rhIL-7 n’a pas modifié de manière significative la fréquence des cellules T CD4 et CD8 co-exprimant le marqueur d’activation CD38 / DR Figure 3 supplémentaire

Effets de la rhIL-7 sur la prolifération des thymocytes et le répertoire des lymphocytes T

Nous avons ensuite quantifié la proportion d’émigrants thymiques récents RTE parmi les lymphocytes T CD4 naïfs, les cellules contenant des cercles d’excision des récepteurs T-cellules et la diversité TCR en utilisant une méthode PCR quantitative en temps réel Comme le montre la figure 3A, pour les sujets traités avec les doses les plus élevées 20 ou 30 ug / kg, la rhIL-7 a augmenté à la fois les lymphocytes T CD4 naïfs et RTE au jour 77 P & lt; 05 pour les deux sous-ensembles par rapport à la ligne de base Nous avons également trouvé une augmentation du rapport sj / β TREC reflétant la production thymique [18] de 46 au jour 0 à 687 à la semaine 12 jour 77, augmentation moyenne du pli, 18; P = 06 Il y avait une relation inverse significative entre la variation du rapport sj / β TREC et la numération des lymphocytes T CD4 au jour 0 et le nadir r = 040; P = 01; Test de Spearman Figure 3B

Figure 3View largeTélécharger la lameLa thérapie recombinante humaine interleukin 7 rhIL-7 augmente le nombre d’émigrants thymiques naïfs et récents RTE CD4 T et élargit le répertoire des récepteurs TCR des lymphocytes T chez quelques sujets Les données présentées concernent des sujets ayant reçu 3 doses de rhIL-7 à 20 ou 30 ug / kg A, l’activité thymique a été évaluée en utilisant les cercles d’excision des récepteurs des cellules T sj / ß. TREC ratio Le traitement avec rhIL-7 a augmenté le nombre de cellules naïves et RTE dans le sang périphérique au jour 77 P & lt; Données regroupées de 05, 20 et 30 μg / kg Le rapport sj / β TREC a tendance à augmenter P = 06, les données regroupées pour 20 et 30 μg / kg B, le compte de lymphocytes T CD4 au jour 0 et le nadir CD4 ont été associés à changement du rapport sj / β TREC entre les jours 0 et 77 P = 01; Test de Spearman C, les sujets avec moins de lymphocytes T CD4 ont connu une augmentation plus importante de la thymopoïèse après traitement rhIL-7 La diversité du répertoire TCR a été évaluée en quantifiant toutes les combinaisons possibles entre les segments Vβ et Jβ. Distribution de pics pour chaque réarrangement Vβ-Jβ chez un patient traité par placebo et un patient traité par rhIL-7 Abréviations: RTE, thymique récent émigrant; TREC, cercle d’excision des cellules TFigure 3View largeDownload slideL’interleuk 7 humaine recombinante rhIL-7 augmente le nombre d’émigrants thymiques naïfs et récents RTE CD4 T et élargit le répertoire TCR des récepteurs des lymphocytes T chez quelques sujets Les données présentées concernent des sujets ayant reçu 3 doses de rhIL-7 à 20 ou 30 μg / kg A, l’activité thymique a été évaluée en utilisant les cercles d’excision des récepteurs des cellules T sj / β TREC ratio Le traitement avec rhIL-7 a augmenté le nombre de cellules naïves et RTE dans le sang périphérique. jour 77 P & lt; Données regroupées de 05, 20 et 30 μg / kg Le rapport sj / β TREC a tendance à augmenter P = 06, les données regroupées pour 20 et 30 μg / kg B, le compte de lymphocytes T CD4 au jour 0 et le nadir CD4 ont été associés à changement du rapport sj / β TREC entre les jours 0 et 77 P = 01; Test de Spearman C, les sujets avec moins de lymphocytes T CD4 ont connu une augmentation plus importante de la thymopoïèse après traitement rhIL-7 La diversité du répertoire TCR a été évaluée en quantifiant toutes les combinaisons possibles entre les segments Vβ et Jβ. Distribution de pics pour chaque réarrangement Vβ-Jβ chez un patient traité par placebo et un patient traité par rhIL-7 Abréviations: RTE, thymique récent émigrant; TREC, cercle d’excision de réception des lymphocytes T Comparativement à la diversité du répertoire des lymphocytes T des témoins historiques, la diversité du répertoire des patients variait de 36% à 83% médiane, 63% à l’inclusion Graphique 3C Les scores de diversité n’augmentaient pas significativement au jour 28 715 % ou semaine 12 643% Figure 3C Les sujets avec une diversité normale de TCR à l’état initial sont restés dans un état stable Quatre sujets avec un faible score de diversité basal qui ont reçu rhIL-7 ont montré une diversité TCR accrue, de 49%, 55%, 36% et 50% à l’entrée à 75%, 61% et 59% deux patients au jour 28 Figure 3C, et ce changement a persisté à la semaine 12 67%, 70%, 52% et 61%; Aucun changement n’a été noté chez un cinquième sujet qui a reçu un placebo Une analyse détaillée des clonotypes de 1 rhIL-7 et 1 placebo-receveur est présentée à la figure 3D.

Effets de l’administration de la rhIL-7 sur la réplication du VIH

Aucun changement dans les taux plasmatiques d’ARN VIH n’a été noté chez les sujets du groupe placebo et 10 μg / kg. En revanche, 4 et 2 sujets des groupes recevant respectivement 20 et 30 μg / kg ont présenté des augmentations transitoires Après l’administration de rhIL-7 & lt; 400 copies / ml en 5 et 1023 copies / ml dans la sixième Aucune modification de la thérapie ARV hautement actif ou des problèmes de conformité ont été identifiés chez ces sujets. chez 2 sujets 85 et 52 copies / mLTable 2 montre l’évolution de la quantité totale d’ADN associé au VIH provenant du VIH Il n’y avait pas de changements significatifs dans les niveaux d’ADN intracellulaire du VIH-1 lorsque ces niveaux étaient exprimés par 106 PBMC ou 106 cellules T CD4, quel que soit le groupe de traitement à la semaine 12 Tableau 2 En revanche, lorsqu’il est exprimé en copies log10 par millilitre de sang, l’ADN du VIH-1 augmente significativement chez les sujets traités avec 20 μg / kg de changement médian, 04 log10 copies / mL, P = 03 par rapport au changement médian du jour 0 ou 30 μg / kg, 05 log10 copies / mL; P = 006 par rapport au jour 0

Tableau 2 Changements dans les niveaux d’ADN du VIH associés aux cellules totales Changement du niveau d’ADN du VIH par rapport à la base, médiane IQR Jour 0 Jour 28 Semaine 12 Groupe de doses Copies / μL Copies / 106 PBMC Copies / 106 CD4 T Cellules Log10 Copies / mL Copies / 106 PBMCs Copies / 106 CD4 T Cellules Copies / μL Copies / 106 PBMC Copies / 106 Cellules T CD4 Placebo n = 6 275 262-298 247 232-270 337 333-341 302 278-307 267 268-279 349 338-354 277 263-294 251 231-275 335 309-358 dose de rhIL-7, μg / kg 10 n = 7 289 272-352 263 234-327 365 316-415 333 300-364 290 250-315 357 305-394 336 289-348 300 244 -319 379 304-392 20 n = 8 352 300-370 324 287-336 404 359-422 384 357-413 338 300-358 406 377-415 363a 323-387 335 287-340 390 362-410 30 n = 6 247 203-345 229 199-294 313 262-403 315 270-379 257 218-315 316 256-380 298a 264-369 249 229-315 312 268-392 Modification du niveau d’ADN du VIH par rapport à dian IQR Jour 0 Jour 28 Semaine 12 Dose Groupe Copies / μL Copies / 106 PBMC Copies / 106 CD4 T Cellules Log10 Copies / mL Copies / 106 PBMC Copies / 106 CD4 T Cellules Copies / μL Copies / 106 PBMC Copies / 106 CD4 T Cellules Placebo n = 6 275 262-298 247 232-270 337 333-341 302 278-307 267 268-279 349 338-354 277 263-294 251 231-275 335 309-358 dose de rhIL-7, μg / kg 10 n = 7 289 272-352 263 234-327 365 316-415 333 300-364 290 250-315 357 305-394 336 289-348 300 244-319 379 304-392 20 n = 8 352 300-370 324 287-336 404 359-422 384 357-413 338 300-358 406 377-415 363a 323-387 335 287-340 390 362-410 30 n = 6 247 203-345 229 199-294 313 262-403 315 270-379 257 218 -315 316 256-380 298a 264-369 249 229-315 312 268-392 Abréviations: VIH, virus de l’immunodéficience humaine; IQR, intervalle interquartile; Les PBMC, les cellules mononucléées du sang périphérique; rhIL-7, interleukine humaine recombinante 7a Augmenté significativement P & lt; 05 par rapport au jour 0 baselineView Large

Sécurité, Tolérabilité et Pharmacocinétique de la rhIL-7

À 10 ou 20 μg / kg, la rhIL-7 était bien tolérée. À 30 μg / kg, une toxicité limitant la dose a été observée chez 2 sujets, l’un avec une augmentation transitoire de grade 3 et l’autre avec une éruption de grade 2 dépression de l’enfant et l’adolescent. -IL-7 anticorps ont été détectés L’analyse pharmacocinétique a montré une perte de la relation linéaire entre l’aire sous la courbe et la dose à 30 μg / kg.

DISCUSSION

Cette étude a été conçue pour identifier une dose bien tolérée de rhIL-7 qui permettrait d’obtenir l’effet biologique principal souhaitable de l’IL-7, à savoir l’expansion du pool de lymphocytes T CD4 chez les sujets infectés par le VIH-1. Expansion des lymphocytes T CD4 jusqu’à 1 an après le traitement par l’IL-7, diminution des proportions de lymphocytes T PD-1 et amélioration de la thymopoïèse avec élargissement du répertoire des lymphocytes T chez quelques sujets. chez les patients infectés par le VIH, comme indiqué avec les formulations précédentes [12] et les différents schémas d’administration [26] La nouvelle formulation de rhIL-7 CYT107 administrée en cycle de 3 injections hebdomadaires a entraîné une augmentation sûre et significative de la T CD4 circulante. De plus, selon la tolérance et l’activité biologique, nous avons déterminé que la dose de 20 μg / kg est idéale pour les futures études. L’infection par le VIH se caractérise par une déplétion progressive des lymphocytes T CD4 due à la destruction directe, à la survie appariement de la production thymique et de la capacité d’expansion des lymphocytes T naïfs [27] Nous montrons que la rhIL-7 augmente majoritairement les sous-populations de cellules T CD4 et CD8 mémoires naïves et centrales La prolifération cellulaire, comme l’indique la coloration de Ki-67, est probablement un mécanisme majeur Bien que difficile à mesurer in vivo, une amélioration de la survie des lymphocytes T due à la rhIL-7 ne pouvait être exclue Un tel effet était suggéré par la diminution de l’expression des marqueurs d’épuisement PD-1 sur les cellules T et l’augmentation transitoire de l’expression de Bcl-2, comme montré dans la présente étude et ailleurs chez les patients cancéreux [15] Un nouvel aspect de la présente étude était la caractérisation du compartiment des cellules T naïves à travers des mesures phénotypiques et moléculaires Nos résultats d’une augmentation de RTE et sj / β TREC étaient compatibles avec un effet de rhIL-7 sur la production thymique et la production et / ou l’expansion d’une population cellulaire plus jeune, par exemple, les cellules T naïves Nous avons également trouvé des changements dans le répertoire TCR chez quelques sujets avec la plus faible diversité TCR à l’entrée Ces observations nécessitent une validation chez des patients supplémentaires et avec un suivi à long terme Bien que dans la présente étude nous ne puissions pas relier ces changements phénotypiques et moléculaires à une restauration de la fonction des lymphocytes T, une étude antérieure de notre groupe a montré que IL-7 Les cellules T CD4 amplifiées réagissent bien in vitro aux mitogènes, aux antigènes de rappel et aux peptides du VIH [22] Des observations similaires ont été faites chez des patients atteints de cancer ayant reçu la rhIL-7 [15] montre qu’une augmentation des cellules T CD4 ne confère pas nécessairement un bénéfice clinique Les analyses des cellules expansées par IL-2 ont montré une expansion prédominante des cellules T CD25 [28] avec une longue demi-vie [29] qui partagent des caractéristiques moléculaires et fonctionnelles En revanche, nous trouvons que la plupart des lymphocytes T CD4 développés chez les sujets traités par rhIL-7 ne présentaient pas de caractéristiques Treg, ce qui entraîne une diminution relative des Tregs dans la population totale de lymphocytes T CD4. L’IL-2 et l’IL-7 sont l’expansion concomitante des lymphocytes T CD8, le profil d’innocuité amélioré et les caractéristiques pharmacocinétiques de la rhIL-7 qui pourraient rendre les injections hebdomadaires faisables [24] À ce jour, les effets à long terme et la sécurité de La rhIL-7 est inconnue Dans des études antérieures sur la rhIL-7, des élévations transitoires des taux plasmatiques d’ARN VIH ont été observées. Une étude récente a suggéré que la population de cellules porteuses d’ADN du VIH pourrait être ciblée et augmentée par l’IL-7 [30] étude, environ 1 sujet sur 4 a connu une augmentation transitoire des taux plasmatiques d’ARN du VIH, et bien qu’il n’y ait pas eu d’augmentation de la proportion de cellules contenant l’ADN du VIH, la concentration d’ADN du VIH par millilitre de sang a augmenté. cette observation reste à déterminer et sera évaluée dans de futures études.Dans une perspective clinique, la rhIL-7 peut s’avérer être un adjuvant thérapeutique attractif dans la maladie du VIH. Si la sécurité est démontrée dans des études à plus long terme, répéter Plusieurs études épidémiologiques ont indiqué que la numération des lymphocytes T CD4 circulants est un prédicteur important de la morbidité, y compris les maladies cardiovasculaires, malignes, rénales et hépatiques dans l’infection par le VIH. même chez les patients atteints de virémie contrôlée recevant un traitement ARV [31-33] Comme indiqué plus haut, l’expérience récente indique que la numération des lymphocytes T CD4 circulants dans le cadre d’une thérapie à base de cytokine de la maladie VIH ne peut pas être un prédicteur valide du bénéfice clinique [ 22] Par conséquent, pour confirmer l’utilité clinique, les essais cliniques devront se concentrer sur les paramètres cliniques afin de déterminer si les effets biologiques prometteurs de l’IL-7 peuvent se traduire en bénéfice clinique

Remarques

Remerciements Les auteurs souhaitent remercier tous les participants à l’étude, ainsi que C Orefice, C Delgrande, Cox, C Janot-Sardet et S Cacciaguerra pour leur soutien clinique, logistique et de laboratoire; l’équipe d’enquête de chaque centre participant; C Morgan et F Aubin pour l’analyse statistique; N Pasqual et N Plantier d’ImmunId; et P Tebas, J Jacobson et C Bazin pour avoir siégé au Comité indépendant de surveillance de la sécuritéDisclaimer MM était le PDG et un actionnaire de Cytheris SA SB et TC sont des employés et des actionnaires de Cytheris SAFCommis financier Ce travail a été soutenu par Cytheris SA, avec l’exception du travail de IS, qui a été soutenu par le Programme de Recherche Intramural de l’Institut National des Allergies et des Maladies Infectieuses, National Institutes of Health, YL, IS et MML ont conçu l’étude, recruté et soigné les participants, interprété les données, et préparé le manuscrit GT, JPR, JDL, JFD, JMM, MF, CG et BR ont participé à la conception de l’étude, le recrutement et les soins des participants, la collecte et l’interprétation des données, et la préparation des manuscrits CR, VAF, JFP, RPS et SB expériences, recueilli, analysé et interprété des données, et participé à la préparation du manuscrit RT analysé et interprété des données, et assisté i n préparation des manuscrits MMSB et TC assistés dans la conception et l’exécution de l’étude, et la préparation des manuscrits Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: Aucun conflit signaléTous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels Conflits d’intérêts que les éditeurs considèrent pertinents au contenu du manuscrit ont été divulgués

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