Association de polymorphismes mononucléotidiques dans l’ILB, mais pas le TNF-α, avec la gravité de la maladie causée par le virus andin

Contexte Virus andin ANDV est le seul agent étiologique du syndrome cardiopulmonaire à hantavirus HCPS au Chili, avec un taux de fatalité d’environ% Les facteurs individuels affectant l’infection à ANDV sont mal compris Dans cette analyse d’association génétique cas-témoins, nous avons étudié le lien entre Les SNP rs et rs sont connus pour jouer un rôle dans l’expression différentielle du gène de l’interleukine B ILB, alors que le SNP rs est impliqué dans l’expression de la nécrose tumorale gène du facteur α TNF-αMethods Un total d’échantillons de patients infectés par ANDV confirmés collectés entre et, et classés en fonction de la gravité de la maladie, ont été génotypés pour SNPs rs, rs, et rsResults Analyse des SNP ILB rs et rs ont révélé un lien entre l’homozygotie des allèles mineurs TT et GG, respectivement, présentant une légère progression de la maladie, alors que l’hétérozygotie ou l’homozygotie pour les principaux allèles CT / CC et TG / TT, respectivement dans les deux SNP ILB est associée à une maladie sévère Aucune association avec le résultat clinique de HCPS n’a été observée pour TNF-α SNP TNS -G & gt; AConclusions Les SNP ILB rs et rs, mais pas TNF -α SNP rs, sont associés au résultat clinique de la maladie induite par l’ANDV, suggérant un lien possible entre l’expression de l’ILB et la pathogenèse de l’ANDV

ANDV, HCPS, ILB, TNF-alpha, virus SNPAndes ANDV, membre du genre Hantavirus au sein de la famille des Bunyaviridae , endémique en Argentine et au Chili Le principal réservoir d’ANDV est le rat pygmée à longue queue Oligoryzomys longicaudatus La transmission à l’homme se produit principalement par l’exposition à l’urine de rongeur en aérosol, la salive et les fèces contenant le virus Cependant, la transmission interhumaine a également été décrite ANDV provoque une maladie respiratoire connue sous le nom de syndrome cardiopulmonaire à hantavirus HCPS. le développement d’un syndrome de fuite vasculaire, conduisant éventuellement à un œdème pulmonaire massif, choc et, dans de nombreux cas, la mort HCPS a été reconnu au Chili et sérologiquement confirmé dans des cas rétrospectifs de En avril, un total de cas confirmés avait été signalé avec un taux de létalité actuel d’environ% Département de l’épidémiologie ministère chilien de la Santé; http: // wwwminsalclÀ ce jour, aucun médicament antiviral, immunothérapeutique ou vaccin approuvé par la Food and Drug Administration n’est disponible pour l’HCPS Les taux de survie des patients reposent largement sur le diagnostic précoce, l’hospitalisation et le soutien pulmonaire et hémodynamique agressif. Il n’y a actuellement aucun biomarqueur sanguin permettant de prédire le résultat de l’HCPS induite par l’ANDV. Plusieurs rapports ont établi des liens entre les polymorphismes mononucléotidiques de l’hôte et la progression de la maladie chez d’autres membres du genre Hantavirus examinés dans Par exemple, une étude menée au Brésil a montré que le SNP hôte dans le promoteur du gène TNF-α du facteur de nécrose tumorale, impliquant la substitution de la guanine G à l’adénosine A, lié au résultat de l’HCPS induite par le virus Araraquara. les résultats de l’infection sont mal compris mais sont susceptibles de s’avérer importants pour prédire la progression de la maladie chez les patients hospitalisés Plusieurs études d’association pangénomique ont rapporté des SNP proches du locus ILB du gène de l’interleukine ILB sur le site de l’hépatite C. chromosomes associés à une réponse virologique soutenue à la thérapie antivirale Ces études ont défini rs CC et rs TT comme un génotype ILB favorable lors de l’infection par le VHC L’expression de l’ILB est plus élevée chez les individus avec des génotypes rs CC et rs TT Génotypes CC et rs non-TT Avec HCV, une expression élevée de ILB est associée à la clairance du virus, une réponse positive au traitement et une meilleure issue de la maladie [,,] IL B ou interféron IFN λ avec IFN-λ IL -, IFN-λ ILA, et IFN-λ, constituent la famille d’IFN de type III revue dans Les membres de la famille IFN-λ interagissent par des récepteurs uniques qui sont distincts des IFN-α / β de type I et IFN de type II -γ IFN receptors L’expression du récepteur IFN-λ se limite principalement aux cellules épithéliales et immunitaires IFN-λ est coexprimé avec d’autres IFN de type I par des cellules infectées par le virus, déclenchant la voie Jak-STAT , et entraînant l’expression de gènes stimulés par l’IFN impliquée dans la réponse antivirale L’infection par ANDV induit l’expression d’IFN-λ dans les lignées cellulaires Vero E, suggérant un lien possible entre l’expression de l’IFN-λ et une réponse antivirale cellulaire De plus, le prétraitement des IFN-λ inhibe l’infection par Hantaan virus , le hantavirus prototypique Sur la base de ces rapports reliant l’infection à hantavirus et le résultat de la maladie avec IFN-λ et TNF-α [,,], nous avons conçu cette étude d’association génétique le résultat de la maladie induite par ANDV chez les patients chiliens et SNP ILS rs et rs, connus pour affecter l’expression de la protéine ILB , ou SNP rs, connus pour jouer un rôle dans la détermination des niveaux de TNF-α

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Population étudiée et échantillons biologiques

Cette étude a inclus des échantillons de sang périphérique, de plasma ou de sérum de patients infectés par ANDV, collectés au moment de l’hospitalisation, entre janvier et janvier. La sélection de l’échantillon était basée sur la disponibilité Approbation pour l’utilisation des échantillons et pour le protocole de recherche conçu L’infection par ANDV a été confirmée par une sérologie positive à l’immunoglobuline M de l’hantavirus ou par la détection du génome de l’ANDV à l’aide de la réaction en chaîne de la polymérase par transcription inverse Selon le comité d’éthique de la Faculté de Médicine de Pontificia Universidad Católica de Chile hypophysaire. Les auteurs ont classé les échantillons en catégories d’infections bénignes et sévères. Une infection bénigne à hantavirus a été caractérisée comme une maladie fébrile avec des symptômes non spécifiques: céphalées, myalgies, frissons, symptômes gastro-intestinaux sans compromis respiratoire ou minime. présentant une fonction pulmonaire altérée rapide et progressive nécessitant un apport d’oxygène et l’utilisation de médicaments vasoactifs, suivie d’un choc ou d’un décès

Tableau Caractéristiques des patients infectés par le virus Andes n = Patients variables, Non% a Sexb Homme Femme Age, moyenne SD, yc Groupe d’âge – y – y – y – y Région latisée au nord ° ° à ° ‘Centre °’ à ° ‘ Sud ° ‘à °’ Zone d’infection Urbain Rural Facteurs de risque Résidant rural Ouvrier agricole Ouvrier forestier Excursioniste Cas de contact Morsure de la souris Résultat Léger Severeg Variable de la mort Patients, Non% a Sexb Homme Femme Age, moyenne SD, yc Groupe d’âge – y – y – y – y Zone sud Latitudine Nord ° à ° ‘Centre °’ à ° ‘Sud °’ à ° ‘Zone d’infection Urbaine rurale Facteurs de risque Résidant rural Ouvrier agricole Ouvrier forestier Excursioniste Cas de contact Morsure de souris Outco Mild Severeg Death Abréviation: SD, déviation standarda Les données ne représentent aucun% de patients sauf indication contraireb Données disponibles pour les patientsc Les données étaient disponibles pour les patientsd Les données étaient disponibles pour les patients Les données étaient disponibles pour les patientsf Les facteurs de risque ont été calculés pour,,, et patients y compris les patients décédés

Tableau disponible Résultats cliniques et de laboratoire au moment de la collecte des échantillons Variable Patients, Non% P Valeur Maladie grave Maladie légère Maladie Fièvre & gt; ° C Symptômes gastro-intestinaux Maux de tête Myalgie Détresse respiratoire & lt; Infiltrations sur la radiographie du thorax Taux de sang &%; bandes Lymphocytose atypique b Thrombocytopénie Augmentation de l’hématocrite Variable Patients, Non% P Valeur Sévère Disease Mild Disease Fièvre & gt; ° C Symptômes gastro-intestinaux Maux de tête Myalgie Troubles respiratoires & lt; Infiltrats sur la radiographie thoracique Dépassement de sang &%; bandes Lymphocytose atypiqueb Thrombocytopénie Augmentation de l’hématocrite a Classifié selon les résultats cliniquesb Défini comme &numsp &numsp &numsp% lymphocytes atypiquesc Défini comme & lt; mmd Défini comme & gt;% pour les hommes et & gt;% pour les femmesView Large

Extraction d’ADN et génotypage SNP

La distribution des SNP évalués a été déterminée avec l’ADN génomique total des individus non apparentés et non infectés par ANDV, obtenus à partir d’une banque d’ADN bien caractérisée et représentative de la population chilienne , la cohorte témoin a été extraite des échantillons à l’aide du QIAamp DNA Mini Kit Qiagen, selon les protocoles décrits ailleurs Le génotypage des SNPs rs et rs a été réalisé comme décrit ailleurs Le génotypage du SNP rs a été réalisé en utilisant un test de SNP TaqMan pré-conçu Applied Biosystems; La réaction d’amplification a été conduite dans un thermocycleur Agilent Technologies de Stratagene MxP, et l’attribution correcte des allèles dans chaque échantillon a été attribuée automatiquement par la version Agilent de MXPro QPCR, comme décrit ailleurs Contrôles positifs et négatifs, décrits dans un précédent étude , ont été utilisés dans chaque test de génotypage

Analyses statistiques

Les symptômes cliniques présentés par les patients lors de l’admission ont été analysés en utilisant un test exact de Fisher à queue pour chaque variable; les analyses ont été effectuées avec la version du logiciel GraphPad; GraphPad L’association entre les polymorphismes et la sévérité de l’infection a été calculée en utilisant un test exact de Fisher avec un tableau de contingence × supposant un modèle d’effet récessif allèle mineur pour rs et rs et un modèle d’effet dominant d’allèle mineur pour rs; Les tests ont été effectués avec la version GraphPad et le logiciel OpenEpi Un test a été utilisé pour vérifier les différences de distribution de l’équilibre de Hardy-Weinberg dans la population infectée par ANDV Un test de Wilcoxon a été utilisé pour déterminer les différences entre les fréquences génotypiques. le groupe témoin et les groupes infectés par le virus ANDV Les différences ont été considérées comme significatives à P & lt;

RÉSULTATS

Analyse des SNPs ILB chez les patients infectés par ANDV

Les informations démographiques disponibles pour les patients sont incluses dans le tableau Les informations cliniques rapportées au moment de la collecte des échantillons figurent dans le tableau La plupart des échantillons ont été obtenus dans des hôpitaux situés dans des régions qui chevauchent la distribution géographique du réservoir de virus. Centre et sud L’âge moyen d’écart type des patients était de plusieurs années, et le% étaient des hommes Tableau La plupart des patients déclaraient avoir été dans un endroit à haut risque et présenter des symptômes typiques de la détresse induite par l’hantavirus. Il a été démontré que les cas de formes sévères, légères et auto-limitées ont une valeur pronostique, avec des différences statistiquement significatives entre les survivants et les non-survivants Ainsi, selon les informations cliniques disponibles, les patients infectés par l’ANDV ont été divisés en groupes principaux, infection légère ou grave, selon le résultat clinique final Ce résultat n’était pas associé au sexe du patient; Une analyse univariée a révélé que la détresse respiratoire, les signes radiographiques d’une maladie pulmonaire et les taux élevés d’hématocrite au moment de la collecte des échantillons différaient significativement selon les résultats cliniques. Les patients infectés par l’ANDV ont révélé que les fréquences pour les génotypes rs CC, CT et TT étaient, et, respectivement, comparées avec, et pour les génotypes rs TT, GT et GG. Figure A Les fréquences alléliques de rs et rs dans le groupe des patients infectés par l’ANDV était similaire à ceux rapportés pour la cohorte témoin, dans laquelle les fréquences des génotypes rs CC, CT et TT sont, et, respectivement, et les fréquences des génotypes rs TT, GT et GG étaient,, et Une comparaison directe des différentes combinaisons de génotypes pour les SNPs r et r entre individus non infectés et infectés par ANDV n’a pas montré de variations significatives dans la distribution du génotype.

Figure Vue largeDownload slideInterféron λ polymorphismes mononucléotidiques SNP parmi la population étudiée A, Distribution des génotypes SNP rs et rs chez les patients infectés par ANDV du virus Andes B, Fréquence de la combinaison génotypique pour les SNP rs et rs dans la population témoin n = et ANDV -infected n = population Le nombre total d’individus dans chaque groupe a été défini comme%, et les pourcentages des individus avec des génotypes possibles ont été calculés. Les nombres dans chaque boîte correspondent au pourcentage d’individus avec un génotype particulier. d’un rapport précédent Figure Voir grandDownload slideInterféron λ polymorphismes mononucléotidiques SNP parmi la population étudiée A, Distribution des génotypes SNP rs et rs chez les patients infectés par ANDV virus ANDV B, Fréquence de la combinaison génotypique pour les SNP rs et rs en population témoin n = et infectée par l’ANDV n = population Le nombre total d’individus dans chaque groupe s définies en%, et les pourcentages de personnes avec des génotypes possibles ont été calculés Les nombres dans chaque case correspond au pourcentage de personnes ayant un génotype particulier des données de groupe de contrôle proviennent d’un rapport précédent Il y avait une augmentation des individus montrant homozygotie pour l’allèle C majeur dans rs et l’allèle T majeur dans la population infectée par ANDV Figure B Dans la cohorte témoin, les deux génotypes SNP étaient dans le test d’équilibre de Hardy-Weinberg, P & gt; En revanche, chez les patients infectés, ces SNP se sont avérés ne pas être en équilibre rs χ =; P =; rs χ = P =, suggérant un effet de sélection possible

Lien entre les SNP ILB et la gravité de la pathogenèse associée à l’ANDV

Ensuite, nous avons évalué si un lien corrélatif existait entre SNP ILB et la sévérité de la pathogenèse associée à ANDV. L’analyse de SNP rs a révélé un lien entre les génotypes qui portent les patients homozygotie T allèle mineur et la gravité de l’infection ANDV odds ratio; % CI, -; P = Figure A Ces observations suggèrent que l’homozygotie pour l’allèle mineur T est associée à une légère progression de la maladie. L’analyse des SNP rs a également révélé un lien entre l’homozygotie pour le risque relatif d’allèle G mineur,; % CI, -; P = et progression légère de la maladie Figure B

Figure Vue largeDownload slideAssociation entre la sévérité de la pathogenèse ANDV du virus Andes et le génotype SNP du polymorphisme mononucléotidique λ de l’interféron Les patients ont été regroupés selon les génotypes SNP rs A et rs B Chaque génotype a été divisé en groupes: ceux ayant un statut homozygote pour l’allèle mineur et le statut hétérozygote ou homozygote pour l’allèle majeur Le nombre total de patients dans chaque groupe était défini en%, et la sévérité de la maladie associée à l’ANDV était évaluée en tant que variable dichotomique à l’aide d’un test exact de Fisher. correspond au pourcentage de patients atteints de maladie légère ou sévère C, Le nombre total de patients décédés a été regroupé selon le génotype SNP rs et rs Le nombre dans chaque case correspond au pourcentage de patients ayant un génotype protecteur homozygote pour l’allèle mineur et avec un génotype de risque statut hétérozygote ou homozygote pour l’allèle principalFigure View largeTélécharger slideAssociati entre la sévérité de la pathogenèse ANDV du virus Andes et le polymorphisme SNP de l’interféron λ polymorphisme mononucléotidique Les patients ont été regroupés selon les génotypes SNP rs A et rs B Chaque génotype a été divisé en groupes: ceux ayant un statut homozygote pour l’allèle mineur, et ceux avec un statut hétérozygote ou homozygote pour l’allèle majeur Le nombre total de patients dans chaque groupe a été défini en%, et la sévérité de la maladie associée à l’ANDV a été évaluée comme variable dichotomique à l’aide d’un test exact de Fisher. Le nombre total de patients décédés a été regroupé selon le génotype des SNP rs et rs. Le nombre dans chaque case correspond au pourcentage de patients ayant un génotype protecteur homozygote pour l’allèle mineur et présentant un risque. statut génotype hétérozygote ou homozygote pour l’allèle majeurNous avons ensuite évalué les SNP ILB dans la sous-population d’individus décédés à cause de H Patients CPS; % de tous les cas étudiés Tableau Conformément à nos résultats pour les SNP dans la cohorte entière infectée,% des patients décédés présentaient une hétérozygotie ou homozygotie pour l’allèle C majeur, tandis que pour les SNP rs,% des patients décédés étaient hétérozygotes ou homozygotes pour le T majeur. allèle Figure C Cette observation suggère fortement que l’hétérozygotie ou l’homozygotie pour les allèles majeurs dans les deux SNP ILB est associée à la gravité de la maladie causée par ANDV

Aucun lien entre le polymorphisme du gène du TNF-α -G & gt; A et la sévérité de la pathogenèse associée à l’ANDV

Aucune donnée n’est disponible sur les fréquences alléliques du polymorphisme SNP rs au sein de la population chilienne. Ainsi, nous avons analysé l’ADN génomique d’individus non infectés, issus d’une banque d’ADN bien caractérisée et représentative de la population chilienne , GA, et les génotypes AA ont été, et, Figure A Ensuite, nous avons évalué SNP rs chez les patients infectés par ANDV; les fréquences pour les génotypes rGG, GA et AA étaient, et, respectivement, Figure B Pour les groupes infectés témoins et ANDV, le SNP était dans le test d’équilibre de Hardy-Weinberg, P & gt; Les fréquences alléliques du SNP rs étaient similaires dans la cohorte témoin et chez les patients infectés par ANDV. Le SNS du TNF-α a ensuite été comparé entre les patients atteints de pathogenèse légère et sévère. La distribution des allèles TNF-α du SNP rs n’a pas été corrélée avec gravité du résultat de l’infection Figure C

Figure Vue largeDownload slideAnalyse du polymorphisme du gène du facteur de nécrose tumorale α TNF-α A, Distribution du polymorphisme mononucléotidique du TNF-α SNP rs chez des individus non infectés obtenus à partir d’une banque d’ADN bien caractérisée et représentative de la population chilienne Le nombre total de patients a été défini comme% C, les patients infectés par ANDV ont été regroupés dans ceux avec un statut homozygote pour l’allèle majeur GG. et ceux ayant un statut non-GG hétérozygote ou homozygote pour l’allèle mineur Le nombre total de patients dans chaque groupe a été défini en%, et la sévérité de la maladie associée à l’ANDV a été évaluée comme variable dichotomique en utilisant un test exact de Fisher. chaque case correspond au pourcentage de patients atteints d’une maladie bénigne ou graveFigure View largeTélécharger la diapositiveAnalyse du polymorphisme du facteur de nécrose tumorale α ge TNF-α A, Distribution du polymorphisme mononucléotidique du TNF-α SNP rs chez des individus non infectés obtenus à partir d’une banque d’ADN bien caractérisée considérée comme représentative de la population chilienne Le nombre total d’individus était défini comme% B, Distribution de SNP TNF-α chez les patients infectés par le virus Andes ANDV Le nombre total de patients a été défini comme% C, les patients infectés par ANDV ont été regroupés dans ceux avec un statut homozygote pour l’allèle majeur GG et ceux avec un non-GG hétérozygote ou homozygote statut de l’allèle mineur Le nombre total de patients dans chaque groupe a été défini en%, et la sévérité de la maladie associée à l’ANDV a été évaluée comme une variable dichotomique en utilisant un test exact de Fisher Le nombre dans chaque case correspond au pourcentage de patients ou une maladie grave

DISCUSSION

Cette observation était quelque peu attendue, car les études sérologiques menées dans les régions endémiques du Chili ont rapporté une proportion non négligeable d’infections à ANDV cliniquement asymptomatiques Les résultats suggèrent que l’hétérozygotie ou homozygotie pour les allèles majeurs des SNP de l’ILB rs C et rs T, connus pour être associés à des niveaux élevés d’expression de l’ILB , sont liés à une mauvaise issue de la maladie chez les patients infectés par ANDV Figure Ces données représentent un renversement de ce qui est observés dans les infections au VHC où ILS SNP rs CC et rs TT sont considérés comme protecteurs Bien que inattendus et contre-intuitifs, nos résultats suggèrent que contrairement à ce qui a été décrit pour le VHC, le système immunitaire inné pourrait jouer un rôle important. , rôle dans la pathogenèse de l’ANDV Les mécanismes précis qui sous-tendent l’association entre une infection sévère à ANDV et le génotype ILB sont encore obscurs Cette étude n’a pas été conçue pour évaluer l’expression des cytokines dans le temps. Par conséquent, aucune conclusion directe ne peut être tirée sur l’association entre l’expression de l’ILB et la progression de la maladie ANDV. documenté par d’autres Les résultats présentés ici établissent un lien clair entre les génotypes rs CC / CT et rs TT / TG, un phénotype d’expression ILB élevé , et une maladie induite par ANDV sévère, ce qui suggère potentiellement une cytokine excessive production et signalisation, avec des effets sur l’expression ILB jouant un rôle dans la progression de la maladie associée à ANDV En accord avec cette possibilité, des niveaux élevés de cellules productrices de cytokines sont observés dans les poumons des patients avec HCPS après la mort , pulmonaire Le fluide des patients avec HCPS semble être exsudatif , et des médiateurs pro-inflammatoires sont trouvés à des niveaux élevés dans le plasma ainsi que l’interstiti rénal Il est bien documenté que les cytokines IFN-λ, y compris l’ILB, favorisent une réponse inflammatoire prolongée des cytokines aux agents pathogènes Il est plausible de prédire qu’une augmentation de l’ampleur de cette réponse pourrait rendre pathogène. La découverte d’une association apparente entre les SNP ILB et la sévérité de la pathogenèse induite par l’ANDV pourrait cependant ne pas être un phénomène général applicable à toutes les maladies induites par l’hantavirus. Les hantavirus mondiaux Le HCPS partage beaucoup mais pas toutes les caractéristiques cliniques de la maladie causées par les hantavirus de l’Ancien Monde, connus sous le nom de fièvre hémorragique avec syndrome rénal. Cela pourrait indiquer que les mécanismes biologiques sous-jacents HCPS et la fièvre hémorragique avec syndrome rénal ne sont pas équivalents. de l’induction de l’IFN-λ varie dans les cellules Vero E infectées par différents hantavirus, ce qui indique que tous les virus induits Une réponse similaire à IFN-λ Il a été démontré que les patients infectés par le virus Puumala présentaient des taux sériques d’IFN-λ significativement plus bas que pendant la phase de convalescence L’importance clinique de cette observation et sa relation possible les résultats peuvent suggérer que le niveau d’expression de l’IFN-λ est essentiel à la résolution de l’infection Il convient de noter que tous les patients inclus dans la présente étude devraient exprimer ILB en réponse Ce qui peut varier entre les individus est le niveau de production d’ILB, selon les génotypes dans les SNP ILB Il reste à élucider quel niveau de production d’IL-B est nécessaire pour éliminer l’infection par ANDV, par opposition à une expression excessive des niveaux qui peuvent mener à la maladie grave Un rapport antérieur a décrit une association entre TNF-α rs et le résultat de HCPS induit par le virus d’Araraquara Dans le cas de l’infection de virus de Puumala, Kanerva et al ont rapporté une association entre SNP et néphropathie épidémique sévère chez les patients finlandais. Il était tentant de prédire qu’une association similaire pourrait exister pour l’HCPS induite par l’ANDV Nos résultats montrent qu’un lien entre le TNF-α et le résultat de l’ANDV Figure II peut suggérer que l’origine ethnique doit être prise en compte lors de l’établissement d’associations génétiques Comme indiqué, le génotype rs AA est faiblement représenté dans la population chilienne. A ce jour, il existe peu d’exemples d’utilisation. de l’information génétique du patient dans la pratique clinique de routine Nous présentons ici des preuves convaincantes que la connaissance du contexte génomique de l’hôte permet de prédire la gravité de la maladie induite par l’ANDV En conclusion, nos résultats montrent que SNP ILS rs et rs, mais pas TNF-α SNP rs , sont associés à la gravité de la maladie induite par l’ANDV, ce qui pourrait permettre d’utiliser ces marqueurs moléculaires comme prédicteurs des résultats cliniques dans l’ANDV patients infectés

Remarques

Remerciements Nous remercions les Docteurs Alejandro Soza, Jaime Cerda et Michael Kann pour la lecture critique du manuscrit et le Dr Michael Rau pour l’avoir édité. Soutien financier Ce travail a été soutenu par l’Iniciativa Cientifica Milenio del Ministerio de Economia, Fomento y Turismo, Instituto Milenio de Inmunología e Projet Inmunoterapia P / -F à MLL, l’Institut National des Allergies et des Maladies Infectieuses, les Instituts Nationaux de la Santé accordent l’AUI à MF et MLL, Bourse Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico au JFM Fondo de Financement de Centros de Investigación en Áreas Prioritarias Centre pour la recherche sur la génomique à JFM, la bourse de doctorat de la Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica à la JA et la bourse de recherche de la Commission uruguayenne Sectorial de Investigación Científica à NE Conflits d’intérêts éventuels Tous les auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le Formulaire ICMJE Conflits potentiels de Intérêts Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués

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