Impact de la thérapie antimicrobienne sur le portage nasopharyngé de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae et Branhamella catarrhalis chez les enfants atteints d’infections des voies respiratoires

Nous avons mené une étude prospective multicentrique pour documenter les changements dans le portage nasopharyngé de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae et Branhamella catarrhalis lors d’une antibiothérapie. Une cohorte d’enfants atteints d’infections respiratoires a subi un prélèvement nasopharyngé avant et après un traitement antibiotique Test de sensibilité, sérotypage, chaîne de polymérase amorcée arbitrairement réaction et électrophorèse sur gel en champ pulsé ont été utilisées pour comparer les souches de S pneumoniae avant traitement et post-traitement. Une diminution significative du transport de toutes les espèces, en particulier S pneumoniae et B catarrhalis a été enregistrée problèmes de peau chez l’enfant. Le risque de transport de PRP chez un enfant donné n’a pas augmenté Aucun des enfants n’a été trouvé pour héberger des souches génétiquement apparentées avec des concentrations inhibitrices minimales Compte tenu de la résistance multiple de PRP, l’antibiothérapie aux β-lactamines a également augmenté l’incidence des souches résistantes aux macrolides, tandis que les macrolides ont choisi des souches résistantes aux macrolides et à la pénicilline

Au cours des dernières années, il y a eu une augmentation alarmante de la résistance aux antibiotiques parmi les agents pathogènes bactériens des voies respiratoires, notamment Streptococcus pneumoniae Ceci est généralement attribué à l’utilisation intensive d’antibiotiques et à la pression de sélection exercée sur les souches bactériennes nasopharyngiennes [ ,] Cet écosystème est le réservoir des agents pathogènes bactériens Haemophilus influenzae, Branhamella catarrhalis, S pneumoniae, etc impliqués dans les infections des voies respiratoires RTIs Avant les années d’âge, les enfants sont plus susceptibles que les adultes d’héberger ces espèces dans leur nasopharynx et de recevoir traitement antibiotique [,,] Le transport du même sérotype S pneumoniae dure généralement plusieurs semaines ou mois, et il n’est donc pas surprenant que les plus forts taux de résistance sont observés chez les jeunes enfants L’impact écologique de l’antibiothérapie, en particulier de résistance croissante, est une grande préoccupation, en particulier en ce qui concerne les enfants [ Des études observationnelles et cas-témoins ont montré que l’utilisation d’antibiotiques augmente le taux de portage de S pneumoniae résistant à la pénicilline Ces études n’expliquent pas pourquoi l’utilisation de médicaments antimicrobiens est un facteur de risque de colonisation nasopharyngée par des souches résistantes. à cet égard, mais peu ont été publiés sur les antibiotiques prescrits pour les infections aiguës aiguës Le but de cette étude était de documenter les changements dans le portage nasopharyngé de S pneumoniae, B catarrhalis et H influenzae induits par les antibiotiques les plus fréquemment prescrits pour la communauté. acquis RTI chez les jeunes enfants

Patients et méthodes

Conception de l’étude Entre octobre et avril, les pédiatres français ont participé à cette étude prospective La population était composée d’enfants des deux sexes, âgés de plusieurs mois, présentant des IGR supérieures ou inférieures acquises en milieu communautaire nécessitant un traitement antibiotique. Des pédiatres prescrivaient le traitement antibiotique de leur choix Puis, selon l’antibiotique prescrit, chaque patient a été affecté aux groupes suivants, correspondant aux principaux antibiotiques utilisés en France dans ce cadre: l’amoxicilline, en mg / kg / j en doses fractionnées; céfaclor, mg / kg / j en doses fractionnées; céfuroxime-axétil, en mg / kg / j en doses fractionnées; céfixime, mg / kg / j en doses fractionnées; cefpodoxime-proxétil, en mg / kg / j en doses fractionnées; amoxicilline / clavulanate, mg / kg / j d’amoxicilline et mg / kg / j de clavulanate en doses fractionnées; et érythromycine / sulfisoxazole, mg / kg / j d’érythromycine et mg / kg / j de sulfisoxazole en doses fractionnées Chaque groupe était fermé lorsque le nombre de patients recrutés atteignait l’échantillonnage nasopharyngé était programmé avant la première visite du traitement et – jours après la fin du traitement Les patients ont été exclus de l’étude s’ils fréquentaient une garderie afin de réduire l’influence de l’échange de souches de personne à personne, avaient reçu un traitement antibiotique dans les mois précédant l’inscription, étaient hypersensibles à l’antibiotique prescrit, avait une maladie sous-jacente sévère, ou avait déjà été inclus dans l’étude des cultures nasopharyngées spécimens nasopharyngés ont été prises avec des tampons de coton à extrémité de coton, immédiatement placé dans le milieu de transport TGV; Sanofi Diagnostics Pasteur, Marnes la Coquette, France, et envoyé au laboratoire de bactériologie de l’hôpital de Créteil Créteil, France Chaque écouvillon a été tourbillonné en μL d’infusion cerveau-cœur et μL a été étalé sur gélose au sang de Columbia additionnée de colistine et d’acide nalidixique. Les isolats ont été identifiés sur la base de la morphologie des colonies, de la coloration de Gram et des caractéristiques biochimiques. Des tests de sensibilité et le sérotypage de H influenzae et de la production de β-lactamase B catarrhalis ont été détectés avec des disques de nitrocefin Céphinase; BioMérieux, Marcy-l’Etoile, France La sensibilité des isolats de S pneumoniae à la pénicilline G a été déterminée sur la base de CMI déterminées par la méthode de dilution en gélose. Les isolats ont été classés comme CMI sensibles à la pénicilline, & lt; μg / mL, résistant aux intermédiaires ≤ MIC ≤ μg / mL, ou MIC hautement résistante, & gt; μg / mL Le sérotype S pneumoniae a été déterminé à l’aide d’un panel de réactifs au latex sensibilisés avec des anticorps produits au Centre National de Référence du Pneumocoque Créteil, France; avec l’aimable autorisation du Dr Pierre Geslin Analyse RAPD de l’ADN polymorphe amplifié de façon aléatoire L’ADN génomique a été extrait comme décrit ailleurs Trois cycles d’amplification ont été effectués, chacun utilisant l’une des amorces oligonucléotidiques suivantes: ERIC-, OPA- ou OPA- réalisée dans un thermocycleur Progene Techne, Cambridge, UK, dans un volume de μL contenant des amorces μmol, des désoxynucléoside triphosphates μmol chacun, un tampon de réaction contenant du chlorure de magnésium mmol, et de l’U de Taq polymérase Appligène, Illkirch, France Les conditions utilisées sont celles décrites [Les produits d’amplification ont été résolus par électrophorèse sur gel d’agarose et ont été détectés par coloration au bromure d’éthidium. Les patrons RAPD ont été examinés et analysés par comparaison visuelle directe des motifs. Electrophorèse sur gel à champ pulsé Les bactéries PFGE ont été cultivées jusqu’à une densité optique de nm. ont été récoltés par centrifugation à g pendant min à ° C, lavés avec mol de NaCl et mmol de Tris hydroch pH de lorure, et incorporé dans de l’agarose à bas point de fusion% La lyse a été effectuée par addition de mole d’EDTA, de mmol de Tris chlorhydrate pH, de% Triton X- et de% deoxycholate, et l’incubation était de h à ° C. les blocs ont été transférés sur M EDTA,% Sarkosyl, et protéinase K mg / mL puis incubés pendant une nuit à ° C. L’ADN pneumococcique a été digéré avec ApaI. Les conditions utilisées étaient celles décrites ailleurs Analyse statistique Les données ont été analysées Concepts, Inc, Berkeley, Californie Le test with avec correction de continuité a été utilisé pour l’analyse statistique. Le test McNemar a été utilisé pour comparer le transport avant et après le traitement antibiotique. Tous les tests ont été effectués et le niveau de signification a été fixé à P & lt; Les effets des caractéristiques de la population, des soins de jour, du type d’ITR, des symptômes, des antécédents de traitement antibiotique, etc. sur le transport rhinopharyngé ont été examinés

Résultats

Population Sept cent cinq patients ont été inclus Les antibiotiques prescrits étaient amoxicilline n =, cefaclor n =, céfuroxime-axétil n =, céfixime n =, cefpodoxime-proxétil n =, amoxicilline / clavulanate n =, et érythromycine / sulfisoxazole n = Les indications étaient otite moyenne aiguë%, RTI% inférieur,% RTI supérieur non spécifique, et pharyngite% Plus de% des patients avaient reçu des antibiotiques & gt; mois avant leur inclusion dans l’étude La moyenne ± SD et les durées médianes sans antibiotique étaient de ± mois et mois, mois, respectivement. La durée moyenne du traitement était de plusieurs jours, – jours Le tableau de données démographiques et cliniques n’a montré aucune différence significative entre les groupes, sauf pour la présence de conjonctivite dans le groupe céfixime P =

Tableau View largeTélécharger slideDonnées démographiques et cliniques pour les enfants atteints d’infections des voies respiratoiresTable View largeTélécharger la lameDonnées démographiques et cliniques pour les enfants atteints d’infections respiratoiresSix cent vingt-neuf patients ont été évalués pour l’analyse des modifications du transport nasopharyngé induites par l’antibiothérapie. les violations de protocole les plus fréquentes conduisant à l’exclusion de l’étude étaient le non-respect du traitement n =, nouveau traitement antibiotique avant la deuxième visite n =, pas d’évaluation post-traitement n =, et non-adhésion au protocole d’étude n = taux de pneumoniae, B catarrhalis et H influenzae ont été isolés de,% n =,% n =, et% n = respectivement, de la population totale n = des enfants,% porté & gt; Les sérotypes pneumococciques les plus courants dans l’ordre décroissant étaient B, F, F et, représentant plus de% des isolats. Quarante-quatre pour cent des souches de S pneumoniae présentaient une sensibilité réduite à la pénicilline. intermédiaire-résistant,%; Les souches de H influenzae et de B catarrhalis productrices de% β-lactamase ont représenté respectivement% et%. La présence des frères et soeurs a augmenté le portage de l’espèce, en particulier chez les enfants soignés à domicile. enfants avec conjonctivite [%] des patients vs [%] des patients sans conjonctivite [P =] Le transport de S pneumoniae a été augmenté chez les enfants avec otite moyenne aiguë [%] des patients vs [%] des enfants sans otite moyenne aiguë [P = Aucune différence significative dans les taux de portage n’a été trouvée par rapport à d’autres manifestations cliniques ou à l’antibiothérapie reçue quelques mois avant l’inscription.

Tableau View largeDownload slideCarriage de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae et Branhamella catarrhalis en relation avec la fourniture de garderie pour les enfants atteints d’infections des voies respiratoiresTable View largeDownload slideCarriage de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae et Branhamella catarrhalis en relation avec la prise en charge Enfants atteints d’infections des voies respiratoiresImpact des antibiotiques Une diminution significative du port de l’une des espèces a été observée, en particulier B catarrhalis et S pneumoniae et aucune augmentation du taux de souches productrices de β-lactamase n’a été enregistrée pour B catarrhalis% vs% avant la thérapie ou H influenzae% vs% avant la thérapie

Table View largeDownloadChangements dans le transport de Haemophilus influenzae et Branhamella catarrhalis après chimiothérapie antimicrobienneTable Voir grandDownload slideChangements dans le transport de Haemophilus influenzae et Branhamella catarrhalis après chimiothérapie antimicrobienne

Table View largeDownloadChangements dans le transport de Streptococcus pneumoniae après chimiothérapie antimicrobienne: taux de résistance à la pénicilline et à l’érythromycineTable View largeTéléchargement dans le transport de Streptococcus pneumoniae après chimiothérapie antimicrobienne: taux de pénicilline et résistance à l’érythromycineS pneumoniae Indépendamment de l’antibiotique reçu, le risque pour un enfant de portant PRP MIC, ≥ mg / L n’a pas augmenté après traitement, / [%]; avant traitement, / [%] tableau La diminution du portage de S pneumoniae, plus prononcée avec l’amoxicilline, le cefpodoxime-proxétil, l’amoxicilline / clavulanate et l’érythromycine / sulfisoxazole, était principalement due à une diminution significative du portage de S pneumoniae sensible à la pénicilline / [%] patients après traitement vs / [%] avant traitement Par conséquent, parmi les isolats pneumococciques, le taux de PRP a augmenté de% avant à% après traitement. Souches pneumoniae portées en fin de traitement Parmi les patients porteurs de S pneumoniae en fin de traitement , n’hébergeaient pas de souche pneumococcique au moment de l’enrôlement, alors qu’ils portaient un autre sérotype et portaient le même sérotype 3 de ces derniers patients hébergeant des souches pour lesquelles les CMI de pénicilline étaient augmentés de>; dilutions après traitement La parenté génétique de chacune de ces paires de souches pneumococciques a été étudiée par analyse RAPD et électrophorèse en champ pulsé, qui a révélé des profils distincts, démontrant qu’aucun d’entre eux n’était génétiquement lié.

Discussion

La flore bactérienne du nasopharynx est en constante évolution Les facteurs contrôlant l’acquisition bactérienne, l’élimination et la ré-acquisition dans cet écosystème sont mal compris Les cultures nasopharyngées réalisées avant le traitement antibiotique dans cette étude confirment que B catarrhalis est le pathogène respiratoire chez les jeunes enfants, suivi de S pneumoniae puis de H influenzae non typable En outre, nous avons confirmé que la présence de frères et soeurs et la prise en charge par un gardien de l’enfant augmentent le transport de l’espèce Last, transport of H influenzae était plus fréquente chez les enfants atteints de conjonctivite, alors que le portage de S pneumoniae était plus fréquent chez les enfants présentant une otite moyenne aiguë Avant traitement, la proportion de souches résistantes était élevée chez les enfants, observation habituelle en France depuis de nombreuses années. notre connaissance, la présente étude est le plus grand conçu spécifiquement pour documenter l’impact des antibiotiques sur le nasopharyng Le transport des principaux agents pathogènes responsables des infections respiratoires supérieures Les enfants fréquentant les garderies ont été exclus de cette étude parce que la fréquentation de tels établissements augmente le taux de résistance et le risque d’échange de souches de personne à personne, particulièrement en ce qui concerne S pneumoniae L’effet du traitement antibiotique semble différer selon le médicament prescrit et l’espèce bactérienne, mais il est plus marqué avec B catarrhalis et S pneumoniae qu’avec H influenzae. Les médicaments ayant le plus d’activité in vitro contre les souches sauvages de S pneumoniae, par exemple l’amoxicilline et le cefpodoxime a provoqué une chute drastique du port de souches sensibles à la pénicilline, augmentant ainsi la proportion de S pneumoniae résistant à la pénicilline après traitement. Cependant, le risque qu’un enfant donné soit porteur de PRP n’a pas été augmenté par traitement. Des résultats similaires ont été rapportés ailleurs. -,] En outre, les antibiotiques β-lactamines ont augmenté non seulement la proportion de souches résistantes à la pénicilline De même, les macrolides ont sélectionné à la fois des souches résistantes aux macrolides et à la pénicilline. Plusieurs études ont montré que les antibiotiques autres que les β-lactamines sont capables de sélectionner les PRP. Ainsi, dans les zones où prédominent les pneumocoques multirésistants, le cyclage des traitements antibiotiques pour tenter de contrôler la résistance semble inadéquat. Le développement de mutants résistants et le transfert horizontal de matériel génétique entre espèces apparentées semblent donc être des événements rares qui nécessitent probablement plus de temps. Le portage nasopharyngé de B catarrhalis a été significativement diminué par les médicaments les plus actifs contre cette espèce in vitro: amoxicilline / clavulanate, céfixime, érythromycine / sulfisoxazole et cefpodoxime. Malgré le pourcentage élevé de souches productrices de β-lactamases, une baisse importante du taux de portage a été observée. noté chez les patients recevant de l’amoxicilline Ce résultat rappelle le taux élevé d’éradication de B catarrhalis du liquide de l’oreille moyenne chez les patients souffrant d’otite moyenne aiguë traitée par l’amoxicilline À l’exception de l’érythromycine / sulfisoxazole et du céfaclor, le transport de H influenzae était légèrement affecté par les différents médicaments. Cefixime et cefpodoxime, parmi les plus actifs contre cette espèce Ce n’est pas la première étude à montrer les mauvais effets des antibiotiques sur le portage de H influenzae Samuelson et al , qui ont étudié le turnover de H influenzae non typable dans le nasopharynx de l’otite -prone enfants en utilisant l’analyse des enzymes de restriction de l’ADN génomique total, n’a trouvé aucun lien direct entre la thérapie antimicrobienne et l’élimination de la colonisation nasopharyngée par une souche particulière Ces résultats sont également en accord avec les données de nos études antérieures et celles d’autres chercheurs. ,,,]

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