Délétion génitale du type de virus de l’herpès simplex chez la femme: effets de la contraception hormonale, de la vaginose bactérienne et de la colonisation vaginale du streptocoque du groupe B

ContexteLes infections génitales dues au virus herpès simplex de type HSV sont caractérisées par une réactivation et une excrétion fréquentes du virus et par le risque de transmission aux partenaires sexuels. Nous avons étudié les effets des coïncidences vaginales et de l’utilisation des contraceptifs hormonaux sur l’excrétion génitale du VHS chez les femmes. À chaque visite, un échantillon vaginal prélevé par écouvillonnage a été prélevé pour la détection du VHS par réaction de polymérase en chaîne, un deuxième prélèvement vaginal sur écouvillon a été effectué pour la détection des germes du streptocoque du groupe B et levure par culture, et un frottis vaginal a été obtenu pour le diagnostic de la vaginose bactérienne par coloration de GramRésultats HSV-ADN a été détecté en% des échantillons vaginaux sur écouvillon Prédicteurs indépendants de l’excrétion génitale HSV- ont été séroconversion HSV au cours des mois précédents ajusté odds ratio [ aOR],; % intervalle de confiance [IC], -, vaginose bactérienne aOR,; % CI, -, colonisation vaginale à haute densité de GBS aOR,; % CI, -, et l’utilisation de contraceptifs hormonaux aOR,; La présente étude identifie l’utilisation de contraceptifs hormonaux, la vaginose bactérienne et la colonisation par GBS vaginale à haute densité comme facteurs de risque d’excrétion génitale du VHS chez les femmes. Parce que les contraceptifs hormonaux sont utilisés par des millions de femmes dans le monde et parce que la vaginose vaginale et vaginale La colonisation par le SGB est une affection vaginale fréquente, même des associations modestes avec l’excrétion du VHS entraîneraient des risques importants attribuables à la transmission du virus.

Il existe des corrélats bien établis de l’excrétion génitale du virus de l’herpès simplex de type HSV chez les femmes, y compris l’acquisition récente d’une infection, un jeune âge de ⩽ ans, une grossesse et une co-infection avec le VIH. L’utilisation de contraceptifs hormonaux est cependant moins claire. Une étude chez des femmes ayant une infection herpétique génitale récidivante et chez qui les prélèvements du tractus génital ont été obtenus quotidiennement n’a pas détecté d’augmentation de la fréquence d’excrétion du VHS associée à l’utilisation de contraceptifs hormonaux optique. Dix ans plus tard, des résultats différents ont été rapportés dans une étude transversale des femmes qui étaient séropositives pour le virus de l’herpès simplex de type HSV-, HSV-, et HIV-, parce que l’excrétion génitale de HSV- était significativement associée à l’utilisation de Contraceptifs hormonaux oraux ou injectables Une étude longitudinale plus récente, qui a comparé la fréquence de l’excrétion génitale du VHS chez les VHS séropositifs et séropositifs au VIH. n avant et ~ jours après l’instauration du traitement hormonal contraceptif, aucune différence significative n’a été observée . Cependant, l’extension de ces résultats à une population séronégative de femmes ou à des femmes utilisant des contraceptifs hormonaux pendant une période prolongée peut ne pas être justifiée. l’effet de l’utilisation de contraceptifs hormonaux sur la fréquence de l’excrétion génitale du VHS chez les femmes est l’effet d’autres coïnfections du tractus génital. L’objectif principal de la présente étude était donc de déterminer les effets de l’utilisation de contraceptifs hormonaux, streptocoque du groupe B La colonisation par le SGB, la colonisation par levures vaginales ou la vaginose bactérienne sur l’excrétion génitale du VHS chez les femmes

Patients et méthodes

Population étudiée

De bout en bout, une étude de cohorte longitudinale des facteurs de risque associés à l’acquisition du SGB vaginal a été menée Les femmes asymptomatiques âgées de plusieurs années qui étaient disposées à revenir pour des visites additionnelles à des intervalles de mois étaient inscrites dans les cliniques de Pittsburgh, Pennsylvanie. , zone Les femmes ont été exclues de l’étude si elles étaient enceintes, présentaient des symptômes ou des saignements du tractus génital, ou utilisaient actuellement des antimicrobiens systémiques Seules les femmes qui n’utilisaient pas d’antiviraux et qui étaient identifiées comme ayant un statut séropositif à l’inscription ou qui ont acquis des anticorps sériques contre le VHS pendant le suivi ont été inclus dans l’analyse actuelle Bien qu’aucune femme incluse dans la présente analyse n’utilisait d’agents antiviraux, le statut des anticorps anti-VIH des participants à l’étude n’a pas été déterminé. sous-ensemble de la cohorte initiale pour une évaluation des facteurs de risque associés à l’excrétion génitale du VHS Après un accord écrit éclairé, les données d’entrevue ont été obtenues au moyen d’un questionnaire normalisé administré par du personnel de recherche formé. L’entrevue comprenait des questions fermées liées à la démographie. caractéristiques, antécédents médicaux, utilisation de produits intravaginaux, comportements sexuels et pratiques contraceptives

Méthodes de laboratoire

Détection du GBS vaginal et de la levure

À chaque visite d’étude, des données sur les caractéristiques démographiques et comportementales, déterminées par des entrevues avec des patients, ont été recueillies; De plus, des échantillons vaginaux sur écouvillon, un frottis vaginal et un échantillon de sérum ont été prélevés chez chaque patient à chaque visite. Pour la collecte des échantillons vaginaux sur écouvillon, un Dacron en fibre de polyester stérile; Un échantillon d’écouvillon vaginal a été placé dans le gel de transport d’Amies. MML Diagnostics Emballage pour la détection du GBS et de la levure par culture Cet échantillon vaginal a été inoculé sur un Columbia. plaque de gélose à l’aide d’une méthode de striation semi-quantitative et on l’a ensuite inoculée dans un milieu de bouillon sélectif. Les plaques et les bouillons ont été incubés toute une nuit en% de dioxyde de carbone à ° C. culture de bouillon, dans la première zone striée sur la plaque, ou dans les première et deuxième zones striées Ces modèles de croissance lumineuse indiquent la présence de ⩽ cfu de GBS par ml de liquide vaginal La croissance de GBS a été classée comme «lourde» & gt ; cfu / mL quand il était également détecté dans les troisième ou quatrième stries, le GBS a été identifié présomptivement sur la base des résultats morphologiques de coloration de Gram et d’une réaction catalase négative, et la détection a été confirmée par le système d’agglutination PathoDX. , des échantillons provenant des cultures en bouillon ont été repiqués sur des plaques de gélose Sabouraud dextrose Gibson Laboratories pour la détection de la levure

Détection de l’appareil génital HSV-

Le deuxième échantillon vaginal prélevé sur écouvillon a été placé dans un cryovial contenant μL de PBS et stocké à-° C avant son utilisation ultérieure pour la détection de HSV-DNA avec PCR en temps réel. La détection de HSV-DNA dans cet échantillon a été réalisée en utilisant une PCR en temps réel qui a amplifié une partie de l’amorce directe du gène de l’ADN-polymérase du HSV, ‘-ATGGTGAACATCGACATGTACGG-‘; «En résumé, l’ADN a été extrait en utilisant le kit de purification d’ADN IT-RAPID Idaho Technologies selon les instructions du fabricant. Le volume d’élution final de ces extractions a été réduit de μL à μL, et les échantillons ont été amplifiés en utilisant le Système de détection de séquence ABI Prism Biosystems Appliqués Un total de μL d’ADN extrait a été ajouté à un mélange maître composé de mmol de chacune des amorces spécifiques au gène HSV-ADN polymérase par litre,% diméthylsulfoxyde et Sybr Green PCR Master Mix contenant Colorant passif ROX et AmpErase Enzyme Applied Biosystems Après incubation à ° C pendant min et incubation à ° C pendant min, les échantillons ont été amplifiés pour des cycles à ° C pour s et à ° C pour min Fluorescence a été lue à la fin de l’étape d’extension effectuée à ° C de chaque cycle, pour confirmer l’application. L’analyse de la courbe de dissociation a ensuite été effectuée pour détecter la présence de produit spécifique au VHS qui avait une longueur de bp et une La confirmation du produit spécifique du VHS a été faite en comparant le pic de fusion d’un échantillon de patient donné avec les pics obtenus par amplification de l’ADN génomique du VHS purifié Biotechnologies avancées Normes de contrôle positif contenant des copies génomiques par réaction ont été analysés pour chaque test Dans tous les cas, l’étalon -copie a montré des résultats positifs d’amplification. Les échantillons de patients présentant un pic de fusion correspondant aux pics témoins superposés ont été considérés comme ayant des résultats positifs.

Détection de la vaginose bactérienne et de l’infection par le HSV

La vaginose bactérienne est caractérisée par le remplacement des lactobacilles normalement prédominants dans le vagin par des bâtonnets Gram négatif anaérobies, par des mycoplasmes génitaux et par Gardnerella vaginalis. Les frottis vaginaux ont subi une coloration de Gram et la flore vaginale a été évaluée selon un système de notation standardisé. la flore vaginale normale dominée par les lactobacilles a reçu un score de – points, la flore intermédiaire a reçu un score de – points, et la vaginose bactérienne a reçu un score de – points Les échantillons de sérum ont été conservés à – ° C jusqu’à HSV- anticorps en utilisant une EIA disponible dans le commerce, comme décrit ailleurs

Analyses statistiques

Toutes les analyses statistiques ont été effectuées à l’aide du logiciel statistique Stata, version Stata, et tous les tests statistiques ont été évalués avec une signification statistique P = équations d’estimation généralisées GEE ont été utilisés pour identifier les facteurs associés à la détection des HSV- dans les prélèvements vaginaux. une méthode de régression capable de modéliser l’attente marginale de résultats corrélés répétés avec des covariables dépendantes du temps et indépendantes du temps Une matrice de corrélation de travail échangeable a été spécifiée et des estimations sandwiches modifiées de la variance ont été calculées L’inférence statistique était basée sur Statistique de test de Wald Des modèles GEE multivariés ont été développés en utilisant la régression progressive ascendante Des variables ont été retenues dans le modèle si la statistique de test de Wald avait une valeur P de ⩽ Les OR moyennés en population dérivée à la fois des modèles GEE univariés et multivariés sont présentés. avec les% CI et les valeurs P

Résultats

Lors de l’inscription, les femmes ont été identifiées comme séropositives au VHS et une autre a contracté une infection par le VHS pendant le suivi. Parmi les femmes séropositives pour le VHS incluses dans la présente analyse,% se sont décrites comme étant noires, blanches comme% et Hispanique, asiatique, amérindienne ou multiraciale Ces dernières femmes ont été regroupées en une seule catégorie raciale, appelée la catégorie «Autre» dans les analyses. Il y a eu un total de visites et de femmes-années de suivi, et HSV-ADN. Selon une analyse univariée, les jeunes enfants âgés de moins de education ans et moins d’éducation were années d’études étaient les caractéristiques démographiques associées à une probabilité accrue d’élimination du VHS des variables comportementales examinées dans les analyses univariées, la fréquence de détection du HSV dans le tractus génital des femmes ayant reconnu avoir eu un nouveau partenaire sexuel au cours des mois précédant la visite d’étude a été jugée presque identique t o la fréquence de détection chez les femmes qui ont nié avoir eu de nouveaux contacts sexuels pendant cette période Comme le montre le tableau, les données des seules visites d’étude étaient disponibles pour cette analyse particulière, car les informations sur les nouveaux partenaires sexuels n’étaient pas collectées lors de l’inscription. ont eu des relations sexuelles vaginales ou réceptives au cours des mois précédant une visite d’étude, n’étaient pas significativement plus susceptibles d’excréter le VHS que les femmes qui avaient été sexuellement abstinentes ou qui n’avaient pas reçu de rapports sexuels oraux réceptifs. Les femmes qui utilisaient l’acétate de depo-medroxyprogesterone ou les pilules contraceptives orales ont été incluses dans une catégorie, à savoir «l’utilisation de contraceptifs hormonaux», car les estimations de risque associées étaient similaires. analysé séparément Bien que l’ADN du VHS ait été détecté plus fréquemment chez les femmes ayant utilisé des comparativement aux femmes qui ne l’ont pas été, cette association n’a pas atteint de signification statistique dans l’analyse univariée OR, vs; P =

Tableau Corrélats univariés de l’excrétion génitale du virus de l’herpès simplex de type HSV- chez les femmes âgées d’un an, selon certaines caractéristiques démographiques Caractéristique Nombre de femmes ayant un caractère caractéristique% de femmes ayant une perte de VHC OU% CI P Race Blanc … Âge, années – … – – – – Arrangement de vie Avec partenaire … Sans partenaire – Education & gt; années … ⩽ ans – Caractéristique Nombre de femmes avec caractéristique Non% de femmes avec HSV- excrétion OU% CI P Race Blanc … Noir – Othera – Age, années – … – – – – Arrangement de vie Avec partenaire … Sans partenaire – Education & gt; années … ⩽ ans – une femme d’origine hispanique, asiatique, amérindienne ou multiraciale

Tableau Corrélations univariées de l’excrétion génitale du virus de l’herpès simplex de type HSV- chez les femmes âgées d’un an, selon certaines caractéristiques comportementales et infections génitales Variable Non des visites d’étude où la variable a été notée Non% des visites d’étude pour lesquelles HSV a été noté OR% CI P Caractéristiques comportementales Nouveau partenaire sexuel Non … Oui – Interveaul vaginal Non … Oui – Sexe oral réceptif Non … Oui – Douchinga Non … Oui – contraception hormonale usée Non … Oui – Infection génitale HSV- seroconversiona Non … Oui – Vaginal Gram coloration morphologique scoreb – … – – – – Levure vaginale Non … Oui – Croissance vaginale GBS sur culturec Aucune … Lumière – H eavy – Variable Nombre de visites d’étude pour lesquelles la variable a été notée Non% des visites d’étude pour lesquelles l’excrétion du HSV a été notée OU% CI P Caractéristique comportementale Nouveau partenaire sexuel Non … Oui – Intervalles vaginaux Non … Oui – Sexe oral réceptif Non … Oui – Douchinga Non … Oui – contraception hormonale usée Non … Oui – Infection des voies génitales HSV- séroconversiona Non … Oui – Vaginal Gram coloration morphologique scoreb – … – – – – Levure vaginale Non … Oui – Croissance vaginale GBS sur culturec Aucune … Lumière – Lourde – NOTE GBS, streptocoque du groupe B Au cours des derniers mois, un score de – dénote une flore normale; -, la flore intermédiaire; et -, le vaginisme bactérien « colonisation légère » a été défini comme la détection de GBS à des concentrations & lt; cfu / g de liquide vaginal; « Forte colonisation » a été définie comme la détection de GBS à des concentrations ⩾ cfu / g de liquide vaginalView LargeGenital élimination de HSV- a été détectée plus fréquemment chez les femmes qui avaient acquis des anticorps HSV au cours des mois précédents table HSV-ADN a également été identifié plus souvent chez les femmes présentant une vaginose bactérienne et chez les femmes présentant une colonisation vaginale à GBS de densité élevée, par rapport aux femmes sans ces résultats. Les femmes ayant un score morphologique de coloration de Gram classé comme intermédiaire, soit un score de – étaient également plus susceptibles d’avoir détecté le HSV dans Cependant, la détection de la levure vaginale par culture n’a pas été associée à l’excrétion génitale du VHS. Comme la colonisation de la levure peut être soit symptomatique soit asymptomatique, une analyse secondaire a été réalisée pour évaluer l’excrétion vaginale. si l’excrétion du VHS était augmentée chez les femmes qui avaient des résultats positifs en culture de levure et des plaintes de prurit vaginal, mais nous avons constaté que la présence de symptômes vaginaux chez les femmes avec la colonisation de levure n’a pas augmenté la fréquence de détection de HSV-données non montrées pour identifier les facteurs indépendamment associés à la présence de HSV-ADN dans le liquide vaginal, des analyses de régression GEE multivariable ont été réalisées Le prédicteur le plus fort de l’excrétion du VHS de l’appareil génital était la récente séroconversion au VHS,; % CI, -; P = Absence d’une flore vaginale prédominante Lactobacillus a également augmenté le risque d’excrétion du tractus génital de HSV- Un score morphologique de coloration de Gram vaginal intermédiaire, qui reflète le nombre réduit de lactobacilles, et la vaginose bactérienne ont été identifiés comme facteurs de risque indépendants OR, [% CI, -; P =] et [% CI, -; P =], respectivement Les femmes ayant une colonisation à GBS à haute densité étaient significativement plus susceptibles de perdre leur HSV que les femmes sans colonisation vaginale à GBS ou les femmes avec une colonisation par GBS à faible densité. % CI, -; P = Enfin, l’utilisation de la contraception hormonale, soit l’acétate de depo-medroxyprogesterone ou les pilules contraceptives orales, a été identifiée comme un facteur de risque indépendant pour la détection du HSV dans le tractus génital OU; % CI, -; P =

Tableau Résultats de la modélisation de l’équation d’estimation généralisée multivariée des facteurs de risque indépendants de l’excrétion génitale du virus de l’herpès simplex de type HSV- chez les femmes âgées ans Facteur de risque ORa ajusté% P VHS séroconversionb – Vaginal Gram tache morphologique scorec – … – – Croissance vaginale du SGB chez les personnes cultivées Aucune … Légère – Lourde – Utilisation contraceptive hormonale – Facteur de risque Ajusté ORa% CI P HSV- séroconversionb – Coloration vaginale Gram coloration morphologique – … – – – – Croissance vaginale GBS sur culture Aucune … Lumière – Lourde – Hormonale utilisation de contraceptifs – NOTE GBS, streptococcie du groupe BRéglée pour toutes les variables montréesb Au cours des derniers mois, un score de – indique une flore normale; -, la flore intermédiaire; et -, la vaginose bactérienne « colonisation légère » a été définie comme la détection de GBS à des concentrations & lt; cfu / g de liquide vaginal; « Colonisation lourde » a été définie comme la détection de GBS à des concentrations ⩾ cfu / g de fluide vaginalView Large

Discussion

des études ont démontré qu’elle est associée à des altérations significatives des concentrations de plusieurs cytokines immunomodulatrices, par rapport aux concentrations de ces cytokines associées à la flore vaginale normale D’autres recherches seront nécessaires pour déterminer les changements locaux ou systémiques induits par la colonisation vaginale. ou la vaginose bactérienne sont responsables de la fréquence accrue de réactivation du VHS dans le tractus génital observée dans la présente étude. Il sera tout aussi important de déterminer les effets spécifiques d’autres agents pathogènes des voies génitales, tels que Chlamydia trachomatis ou Trichomonas vaginalis, sur réactivation et excrétion de HSV-La présente étude est la première étude longitudinale à démontrer une association de l’utilisation de contraceptifs hormonaux oraux et injectables avec une augmentation de l’excrétion génitale HSV- Les pathomécanismes spécifiques responsables de cette association attendent l’élucidation, mais ils peuvent inclure le sexe stero Changements induits par l’identité dans l’immunité ou la physiologie des voies génitales locales Les altérations de la réponse immunitaire à médiation par les cellules T – en particulier celles provoquées par l’immunosuppression – sont considérées comme primordiales dans la réactivation du HSV de la latence . que les lymphocytes T CD sont le type cellulaire qui est principalement responsable du maintien de la latence du virus herpès simplex avec les neurones sensoriels De plus, la clairance virale des lésions HSV récurrentes est fortement corrélée avec l’infiltration locale des lymphocytes T cytotoxiques spécifiques du VHS. on pense que des niveaux accrus d’œstrogène et de progestérone suppriment les réponses immunitaires à médiation cellulaire afin de créer un environnement plus réceptif pour le sperme allogénique et le fœtus , l’atténuation ou la modulation de cette réponse par les stéroïdes exogènes peut augmenter la durée et / ou la fréquence de l’excrétion du HSV- de l’appareil génital de la femme D’autre part, les femmes qui utilisent des contraceptifs oraux Les pilules sont connues pour avoir de plus grandes zones d’ectopie cervicale, comparativement aux femmes qui n’utilisent pas de pilules contraceptives orales , et cette extension de l’épithélium cylindrique monocouche sur l’exocol peut faciliter l’excrétion génitale du VHS. Les contraceptifs hormonaux oraux et injectables sont également susceptibles d’augmenter l’excrétion génitale du VHS. Cependant, comme l’ectopie cervicale est plus souvent associée à l’utilisation de pilules contraceptives orales, l’ectopie cervicale peut ne pas être le mécanisme prédominant responsable de ces résultats. L’étude actuelle comprend sa conception longitudinale et sa capture de ~ années-femme de l’enquête de suivi, il possède plusieurs limitations Quotidiennement, plutôt que par intermittence, la collecte des échantillons vaginaux sur écouvillon aurait probablement entraîné une détection accrue de HSV- les échantillons vulvaires et périanaux, qui auraient également augmenté la probabilité de détection du VHS, n’étaient pas obtais ned Des preuves récentes suggèrent également que le lavage cervico-vaginal est une technique plus sensible que l’utilisation d’échantillons prélevés sur le tractus génital pour la détection par PCR du VHS- Malgré ces limites d’échantillonnage, la fréquence de détection du VHS dans la présente étude % est similaire à la fréquence de détection% observée chez les femmes infectées par le VHS qui, sur une base quotidienne pendant des mois, prélèvent des écouvillons prélevés dans les régions cervicovaginales, vulvaires et périanales dans une étude récente sur la transmission de l’herpès génital Nos analyses sont également limitées par l’absence de données concernant la présence d’autres agents pathogènes de l’appareil reproducteur, y compris Neisseria gonorrhoeae, C trachomatis et T vaginalis. La présente étude démontre que les syndromes génitaux communs et les organismes colonisateurs sont associés à une excrétion accrue de HSV-, il sera important d’évaluer le rôle de ces autres coïncidences du tractus génital dans les futures études sur l’excrétion du HSV, car la grande majorité des Les infections génitales dues au VHS chez les adultes sont le résultat de la transmission hétérosexuelle du VHS, et parce que presque toutes les infections néonatales au VHS sont acquises périnatalement au contact des sécrétions génitales infectées pendant l’accouchement, une compréhension plus complète des facteurs qui favorisent l’excrétion du VHS. – Dans l’appareil génital des femmes est susceptible d’aider à réduire le risque de transmission hétérosexuelle et mère-enfant de HSV- La présente étude a identifié l’utilisation de contraceptifs hormonaux, la vaginose bactérienne, et la colonisation vaginale GBS comme facteurs de risque indépendants pour les voies génitales excrétion de HSV chez les femmes Parce que les contraceptifs hormonaux sont utilisés par & gt; Comme la vaginose bactérienne et la colonisation vaginale à GBS sont les affections génitales les plus courantes chez les femmes en âge de procréer, même des associations modestes entre ces variables et l’excrétion génitale du VHS entraîneraient des risques importants de transmission. du virus

Remerciements

Soutien financier Institut national des allergies et des maladies infectieuses, National Institutes of Health NIH [Bethesda, MD]; contrat N-A- et subvention U-A– et le programme de formation sur le SIDA et la microbiologie moléculaire / épidémiologie, subvention NIH T-AI [à TLC] Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits

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